[发明专利]纳豆芽孢杆菌NT-6菌株生产的复合抗菌肽及其生产方法

权利要求书

1.纳豆芽孢杆菌NT-6菌株生产的复合抗菌肽，其特征在于：该复合抗菌肽是由iturins、fengycins和surfactins三类抗菌脂肽同系物的混合物组成，它们的比例分别是10~20%、25~35%和50~60%；其中iturins同系物分子量分别为：10432、1057.2、1071.0、1071.0；Fengycins同系物分子量分别为：1491.7、1492.5、1505.7、1519.7；Surfactins同系物分子量分别为：994.3、1009.0、1008.8、1009.9、1008.7、1022.7、1022.6、1036.8、1036.5、1036.6、1051.8、1050.6、1051.2、1051.6、1065.8、1080.2道尔顿（Da），该复合抗菌肽为黄色粘稠物，水溶性好；能耐受100℃ 30min的加热；在pH 2~12活性不丧失；耐受木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶的水解；口服具有较高安全性；能抑制多种革兰氏阳性、阴性致病或腐败细菌，尤其对霉菌具有良好的抑制作用。

2.纳豆芽孢杆菌NT-6菌株生产的复合抗菌肽的生产方法，其特征在于: 该方法采用的生产菌株为纳豆芽孢杆菌Bacillus natto NT-6菌株，16SrRNA 基因序列 GenBank 登录号为JN180628；

所用培养基的组成为： 

1）种子培养基(g/L): 胰蛋白胨8.0~12.0g， 酵母膏3.0~8.0g， NaCl 3.0~7.0g，水1000mL，pH7.0~7.5；

2) 液体发酵培养基：培养基-1: 葡萄糖8.0~12.0g，谷氨酸钠3.0~7.0g，MgSO₄ 0.3~0.7g， KCl 0.3~0.7g，KH₂PO₄ 0.8~1.2g，FeSO₄ 0.10~0.20mg，MnSO₄  3.0~7.0mg，CuSO₄ 0.15~0.18mg，水1000mL，pH6.5~7.0；或培养基-2: 葡萄糖8~12g，土豆80~120g，水1000mL；

3）固体发酵培养基：稻壳或甘蔗渣50~80g， 麸皮15~25g，谷氨酸钠3~7g， 葡萄糖3~7g，水150mL；

方法一：将纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)NT-6菌株通过种子培养基进行种子的扩大培养，接种量为种子培养基体积的2%，28～35℃，在液体发酵培养基中进行液体深层发酵30～48 h，发酵液经离心去除菌体，然后在上清液中加入HCl 调整pH到2，静置后离心，沉淀用甲醇或乙醇进一步提取，提取物经赋型剂吸附、干燥，得抗菌肽成品；

方法二：将纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)NT-6菌株通过种子培养基进行种子的扩大培养，接种量为种子培养基体积的2%，28～35℃，在液体发酵培养基中进行液体深层发酵30～48 h，发酵液经离心去除菌体，然后将上清液浓缩，经甲醇或乙醇提取后，浓缩干燥，经赋型剂吸附、得抗菌肽成品；

方法三：将纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)NT-6菌株通过种子培养基进行种子的扩大培养，接种量为种子培养基体积的2%，28～35℃，在液体培养基中进行液体深层发酵30～48 h，发酵液经离心去除菌体，然后将上清液浓缩，赋型剂吸附、干燥，得抗菌肽成品；

方法四：将纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)NT-6菌株通过种子培养基进行种子的扩大培养，将5-10%接种于固体发酵培养基，在28～37℃的条件下培养2～4天后，再经甲醇或乙醇提取后，干燥，赋型剂吸附，混匀，得抗菌肽成品；或发酵后直接干燥，粉碎，得抗菌肽成品。

3.根据权利要求1所述的纳豆芽孢杆菌NT-6菌株生产的复合抗菌肽，其特征在于：所述的复合抗菌肽在食品防腐、饲料添加剂、医药和农用生物防治等方面的应用。