[发明专利]鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对及其应用，特别涉及可以鉴定或辅助鉴定牛、羊、猪、鸡和鸭这五种动物中至少一种动物的组织和/或器官的PCR引物对。

背景技术

目前在国内生肉和肉制品的生产和销售领域，一些不法商贩为了牟取暴利，利用掺杂掺假等手段欺骗消费者的事件时有发生。比如用猪肉冒充羊肉、猪肉冒充牛肉以及用鸡肉或鸭肉冒充其它价格较高肉类等。因此一套快速、准确鉴别肉种类，并且能够适应混合肉制品鉴定的方法，无疑会为执法人员提供了强大的技术支撑。

传统的肉制品鉴定的方法主要是基于蛋白质水平的分析，包括电泳法、免疫法、ELISA等技术。操作过程中首先需制备相应物种的抗体，然后抗原和抗体间进行免疫反应，最后通过电泳或者显色等方法进行鉴别。这类鉴别技术受蛋白质(主要起作用的部分为抗原决定簇)结构的影响很大，实际应用中经常出现的问题包括：1.热加工过程会改变蛋白质(抗原决定簇)的结构，因而无法检测热加工的肉类；2.对混合肉类的检测可能出现交叉反应，因为不同物种蛋白质的结构可能具有某种程度的相似性，检验的灵敏程度取决于制备的抗体的特异性强弱。

基于以上原因，以核酸为基础的检测方法成为近几年食品检测领域的发展方向，包括DNA分子杂交法和PCR方法等。DNA分子杂交法操作复杂，且成本较高，目前已逐渐被PCR方法所取代。PCR方法灵敏度高、特异性强，可对混合肉类进行鉴别和区分，即使掺杂少量异种肉，也能用PCR方法加以鉴别；PCR方法可用于热加工的肉制品鉴别当中，高温过程仅仅打断了核酸的片断，并不会完全降解核酸，因而热加工的肉制品当中仍然存在可扩增的模板，这在饲料工业肉骨粉来源的鉴别过程中得到了很好的证实；PCR反应的迅速，结果易于观测，使得这种检测方法目前广泛应用在饲料、保健品的动物源性成分的鉴别当中。目前，也有使用PCR方法进行牛、羊、猪、鸡、鸭等肉类鉴别的报道，但普遍着重于单个肉种，系统性较差；即使将方法整合，在PCR鉴别过程中，不同肉种的退火温度同一性较差，需要进行多个退火温度，进行不同PCR反应才能进行判断。

PCR技术中，引物设计是PCR成功的关键因素，好的引物将使检测实验更加快捷，结果更加清晰。

发明内容

本发明的目的是提供鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对或引物对组合物，以及利用所述引物对或引物对组合物鉴定待测动物组织和/或器官中是否含有牛、羊、猪、鸡和鸭这五种动物中至少一种动物的组织和/或器官的方法。

本发明所提供的鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对既可为鉴定或辅助鉴定猪组织和/或器官的PCR引物对，也可为在含有鉴定或辅助鉴定猪组织和/或器官的PCR引物对的前提下，再含有鉴定或辅助鉴定猪、牛、羊、鸡、鸭组织和/或器官的5个PCR引物对中其余四个引物对中的全部、或任意三对、或任意两对、或任一对形成的引物对组合物。具体分为如下五种：

1、鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对组合物，由独立包装的五个引物对组成，第一对引物是由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定猪组织和/或器官的PCR引物对，第二对引物是由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定牛组织和/或器官的PCR引物对，第三对引物是由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定羊组织和/或器官的PCR引物对，第四对引物是由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定鸡组织和/或器官的PCR引物对，第五对引物是由序列表中序列9和序列10所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定鸭组织和/或器官的PCR引物对；所述动物为牛、羊、猪、鸡、鸭中的至少一种。

2、鉴定或辅助鉴定动物组织和/或器官的PCR引物对组合物，由独立包装的四个引物对组成，其中一个引物对是由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定猪组织和/或器官的PCR引物对，另外三个引物对为下述四个引物对中的任三个：由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定牛组织和/或器官的PCR引物对、由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定羊组织和/或器官的PCR引物对、由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定鸡组织和/或器官的PCR引物对、由序列表中序列9和序列10所示的两条单链DNA组成的鉴定或辅助鉴定鸭组织和/或器官的PCR引物对；所述动物为牛、羊、猪、鸡、鸭中的至少一种。