[发明专利]猪圆环病毒Ⅱ型、猪细小病毒和猪伪狂犬病毒的多重PCR检测及其专用引物

权利要求书

1.一种检测病毒的专用引物，包括引物对A、引物对B和引物对C，

所述引物对A包括引物1和引物2，

所述引物对B包括引物3和引物4，

所述引物对C包括引物5和引物6，

所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述引物5和所述引物6的核苷酸序列分别为序列表中的序列1、序列2、序列3、序列4、序列5和序列6。

2.根据权利要求2所述专用引物，其特征在于：所述专用引物由引物对A、引物对B和引物对C组成，

所述引物对A由引物1和引物2组成，

所述引物对B由引物3和引物4组成，

所述引物对C由引物5和引物6组成。

3.根据权利要求1或2所述专用引物，其特征在于：所述病毒为如下3种病毒中的至少一种：猪圆环病毒II、猪细小病毒和猪伪狂犬病毒。

4.一种制备检测病毒的PCR试剂，由权利要求1-3中任一所述的专用引物中的引物对A、引物对B、引物对C、dNTP、DNA聚合酶和PCR缓冲液组成；

所述专用引物中所述引物对A的各引物在所述PCR试剂中的终浓度各为2.0μM，所述引物对B的各引物在所述PCR试剂中的终浓度0.8μM，所述引物对C的各引物在所述PCR试剂中的终浓度1.5μM；

每种所述dNTP在所述PCR试剂中的终浓度均为0.2mM；

所述DNA聚合酶在所述PCR试剂中的终浓度均为0.05U/μL。

5.根据权利要求4所述PCR试剂，其特征在于：所述病毒为如下3种病毒中的至少一种：猪圆环病毒II、猪细小病毒和猪伪狂犬病毒。

6.一种制备检测病毒的试剂盒，为含有权利要求4或5所述的PCR试剂的试剂盒。

7.根据权利要求6所述试剂盒，其特征在于：所述病毒为如下3种病毒中的至少一种：猪圆环病毒II、猪细小病毒和猪伪狂犬病毒。

8.权利要求1-3中任一所述引物或权利要求4或5所述试剂或权利要求6或7所述试剂盒在检测病毒或制备检测检测病毒产品中的应用；所述病毒具体为如下3种病毒中的至少一种：猪圆环病毒II、猪细小病毒和猪伪狂犬病毒。

9.一种检测或辅助检测待测样本病毒的方法，包括如下步骤：

权利要求1-3中任一所述引物或权利要求4或5所述试剂或权利要求6或7所述试剂盒中的所述引物对A、引物对B和引物对C对待测样本进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；检测扩增产物，

若仅得到大小为1265bp的PCR产物，则样本中含有或候选含有猪圆环病毒II；

若仅得到大小为748bp的PCR产物，则样本中含有或候选含有猪细小病毒；

若仅得到大小为342bp的PCR产物，则样本中含有或候选含有猪伪狂犬病毒；

若得到大小为1265bp的PCR产物和大小为748bp的PCR产物，则样本中含有或候选含有猪圆环病毒II和猪细小病毒；

若得到大小为1265bp的PCR产物和大小为342bp的PCR产物，则样本中含有或候选含有猪圆环病毒II和猪伪狂犬病毒；

若得到大小为748bp的PCR产物和大小为342bp的PCR产物，则样本中含有或候选含有猪细小病毒和猪伪狂犬病毒；

若得到大小为1265bp的PCR产物、大小为748bp的PCR产物和大小为342bp的PCR产物，则样本中含有或候选含有猪圆环病毒II、猪细小病毒和猪伪狂犬病毒；

所述1265bp的PCR产物的核苷酸序列为序列表中的序列7；

所述748bp的PCR产物的核苷酸序列为序列表中的序列8；

所述342bp的PCR产物的核苷酸序列为序列表中的序列9；

所述PCR扩增中，以待测样本的基因组DNA为模板；

所述PCR扩增的退火温度为55℃-60℃，所述PCR扩增的退火温度具体为58℃；

所述检测扩增产物的方法为琼脂糖凝胶电泳或测序。

10.一种检测圆环病毒II的引物对，由引物1和引物2组成，所述引物1和所述引物2的核苷酸序列分别为序列表中的序列1和序列2；

或一种检测猪伪狂犬病毒的引物对，由引物5和引物6组成，所述引物5和所述引物6的核苷酸序列分别为序列表中的序列5和序列6。