[发明专利]抗细胞型朊蛋白单克隆抗体在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种与人体正常粘膜所分泌的天然蛋白-细胞型朊蛋白(cellular prion protein)，相结合的单克隆抗体的杂交瘤，由该杂交瘤产生的抗细胞型朊蛋白单克隆抗体及其在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

结直肠癌是世界第三大恶性肿瘤。近二十多年来，结直肠癌发病率逐年上升，尤其是亚洲国家结直肠癌发病率上升趋势十分明显，致死率居高不下，位居癌症死因的第二位。目前，世界上治疗肿瘤的主要方法是手术、放疗、化疗和生物治疗等四种。从医学角度看，至今肿瘤的治疗没有一种完全有效的手段，尤其是已经发生转移的肿瘤患者，传统的治疗方法无法控制肿瘤的全身扩散。

编码细胞型朊蛋白的基因PRNP定位于20号染色体，基因全长20kb，包含2个外显子。PRNP基因转录的mRNA长度为2.5kb(NM_000311)，编码由253个氨基酸组成的蛋白质，具有高度不稳定的5个串联八肽重复区(5 tandem octapeptide重复区)。细胞型朊蛋白与疯牛病致病性朊病毒蛋白具有相同的氨基酸序列，为同一个基因PRNP所编码。但在三级结构方面，细胞型朊蛋白具有丰富的α螺旋的三级结构，而致病性朊蛋白表现为β折叠。

相对于朊病毒的研究，细胞型朊蛋白的功能尚未得到明确的认识。朊蛋白基因敲除小鼠的研究提示细胞型朊蛋白缺失后小鼠会出现心律失常、昼夜节律改变等症状。目前已经发现细胞型朊蛋白与乳腺癌、前列腺癌、肝癌和结肠癌等多种肿瘤相关(Mehrpour，M.；Codogno，P.，2009.Cancer Lett.，290：1-23)，在胃癌和乳腺癌中细胞型朊蛋白表达与Bcl-2上调相关，参与发挥抑制细胞凋亡功能(Liang，J.；Pan，Y.L.；Ning，X.X.；Sun，L.J.；Lan，M.；Hong，L.；Du，J.P.；Liu，N.；Liu，C.J.；Qiao，T.D.；Fan，D.M.，2006.Tumour.Biol.，27：84-91)(Li，Q.Q.；Cao，X.X.；Xu，J.D.；Chen，Q.；Wang，W.J.；Tang，F.；Chen，Z.Q.；Liu，X.P.；Xu，Z.D.，2009.Cell Mol.Life Sci.，66：504-515)。细胞型朊蛋白能抵抗肿瘤坏死因子RNF-α和TRAIL引起的乳腺癌细胞凋亡(Diarra-Mehrpour，M.；Arrabal，S.；Jalil，A.；Pinson，X.；Gaudin，C.；Pietu，G.；Pitaval，A.；Ripoche，H.；Eloit，M.；Dormont，D.；Chouaib，S.，2004.Cancer Res.，64：719-727)(Meslin，F.；Hamai，A.；Gao，P.；Jalil，A.；Cahuzac，N.；Chouaib，S.；Mehrpour，M.，2007.Cancer Res.，67：10910-10919)，此外还有报道指出细胞型朊蛋白通过增加葡萄糖水平上升来促进结肠癌细胞生存(Li，Q.Q.；Sun，Y.P.；Ruan，C.P.；Xu，X.Y.；Ge，J.H.；He，J.；Xu，Z.D.；Wang，Q.；Gao，W.C.，2011.Cancer Sci.，102：400-406)。Dodelet等人报道细胞型朊蛋白对于CD34+造血干细胞的自我更新是必须的(Dodelet，V.C.；Cashman，N.R.，1998.Blood，91：1556-1561)，Weinberg的研究结果提示细胞型朊蛋白可能与乳腺细胞球状体形成相关(Liao，M.J.；Zhang，C.C.；Zhou，B.；Zimonjic，D.B.；Mani，S.A.；Kaba，M.；Gifford，A.；Reinhardt，F.；Popescu，N.C.；Guo，W.；Eaton，E.N.；Lodish，H.F.；Weinberg，R.A.，2007.Cancer Res.，67：8131-8138)。尽管以上报道提示细胞型朊蛋白可能与多种肿瘤相关，但是细胞型朊蛋白在人类肿瘤中的具体生理功能至今还不清楚，对于肿瘤发生、发展的作用机制未见报道。