[发明专利]一种铁皮石斛人工种子的制作方法

权利要求书

1.一种铁皮石斛人工种子的制作方法，其特征在于：

其具体步骤为：

1)原球茎的诱导：选择铁皮石斛健康植株，经过切段、灭菌、清洗后，接种于预先做好的分化增殖培养基的组培瓶中，在培养基上诱导出原球茎，然后进行原球茎的增殖培养；

2)人工种子的制作：将原球茎再转入含有0.5mg/L的ABA的MS培养液内，以100r/min的速度震荡培养，每10d更换1次培养液；30d后选取长×宽为0.5-1.5mm×2.0-3.4mm的原球茎作为包埋繁殖体，采用滴注法进行人工种子制作；以MS培养基、4mg/L的6-BA、0.4mg/L的NAA、2％的海藻酸钠和0.2％的多菌灵为基本人工胚乳；以海藻酸钠添加2％壳聚糖和5.0-10％纳米TiO₂为人工种皮基质；将原球茎浸入人工胚乳中，使原球茎与包埋剂充分混合均匀；5-10min后用滴管将包有原球茎的半凝胶状态海藻酸钠滴入到人工种皮基质的2％CaCl₂溶液中进行固化，控制每滴包含一个原球茎，30min后用培养液漂洗15min，即得人工种子。

2.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛人工种子的制作方法，其特征在于：所述的分化增殖培养基为：MS培养基、4mg/L的6-BA和0.4mg/L的NAA混合。

3.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛人工种子的制作方法，其特征在于：

步骤1)中，所述的切段、灭菌和清洗具体为：选择生长旺盛、无病害的铁皮石斛健康植株，每2节为一段放入500ml的烧杯中，加入少量洗衣粉，用纱布单层棚扎杯口，然后用工程线扎紧，放在自来水龙头下冲洗30min，冲水量调整到能使铁皮石斛茎段在水中漂动；洗去外表尘土和大颗粒菌落、菌丝等；将上述完成后的材料带到无菌室超净工作台上，进行二次消毒灭菌：将茎段腋芽的苞叶拨去，用70％的酒精速浸25s，然后用0.1％的升汞溶液浸泡10min，灭菌过程中不断摇动烧杯使灭菌更加彻底，然后用无菌水冲洗5次，去掉表面药物残留。

4.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛人工种子的制作方法，其特征在于：

步骤1)中，所述的接种、诱导过程具体为：将经切段、灭菌和清洗后的石斛茎段剪成每一节为一段，去掉药物浸透的茎段部分，接种于预先做好的分化增殖培养基的组培瓶中，放在培养基上培养；培养条件：温度26℃，光照时间12h，光照强度2000Lx；30d后诱导出原球茎。

5.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛人工种子的制作方法，其特征在于：为了增加透气、保持水分便于吸收，在人工胚乳中添加1.5-2.0％的淀粉、1.0-2.0％活性炭、1.0-2.0％保水剂和1.0-3.0％的纳米TiO₂。