[发明专利]基于部花菁的检测次氯酸的荧光探针及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种荧光探针，尤其是涉及一种以二甲胺基硫代甲酰基为酚羟基保护基团、以部花菁为荧光团的荧光探针及其制备和在中性条件下水溶液中次氯酸荧光法检测中的应用。

背景技术

次氯酸(HClO)是生物体髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)介导产生的一种重要的活性氧物种，在多种生理、病理过程中扮演重要角色。设计合成具有高灵敏性、专一性强的HClO荧光探针，建立应用于细胞内HClO的荧光显微成像方法，实现目标分子实时、原位的示踪，为研究生物体内与HClO相关的分子和细胞事件，以及与之相关的疾病的药物筛选与评价提供可靠信息，具有重要的科学意义及应用前景。该领域已成为人们研究的热点之一。

近几年来，已报道了数种针对HClO的荧光探针，如DCFH、DHR(参见文献：A.Bizyukin，et al，Bull.Exp.Biol.Med.1995，119，347.)、APF(参见文献：T.Nagano，et al，J.Biol.Chem.2003，278，3170.)、MitoAR(参见文献：T.Nagano，et al，J.Am.Chem.Soc.2007，129，10324.)等，但以上探针除了能够检测HClO，对其他的活性氧物种亦有不同程度的荧光响应。由于每种活性氧都有其各自独特的生理活性，因此对专一性强的HClO荧光探针的需求显得尤为迫切。已报道的另外一些HClO探针中，有的需在强碱性(如pH 12)的苛刻条件下使用(参见文献：H.M.Ma，et al，Chem.Eur.J.2008，14，4719.)，或水溶性差(参见文献：W.Tan et al，Chem.Eur.J.2009，15，2305.)，无法真正应用于生物体系中。目前，能够实际应用于中性条件下水溶液中HClO检测的荧光探针极少，且需在繁琐苛刻的条件下高成本制备而得(参见文献：T.Nagano，et al，J.Am.Chem.Soc.2007，129，7313.；文献：J.Tae，et al，Org.Lett.2009，11，(4)，859.；文献：R.Weissleder，P.Libby，et al，Chem.Biol.2007，14，1221.)。

发明内容

本发明的目的在于针对已报道的各种HClO荧光探针所存在的不足与缺陷，提供一类高灵敏、高选择性的基于部花菁的检测次氯酸的荧光探针及其制备方法。

所述基于部花菁的检测次氯酸的荧光探针(以下记为探针1)的分子结构式如下：

探针1

所述基于部花菁的检测次氯酸的荧光探针为含有部花菁荧光团结构的、以二甲胺基硫代甲酰基为酚羟基保护基的二甲胺基硫代甲脂基部花菁化合物。

所述基于部花菁的检测次氯酸的荧光探针的合成路线如下所示：

其合成方法的步骤为：

1)中间体A的合成：在容器中按摩尔比加入1.0份的氢化钠，N₂气氛下加入DMF，冰浴下搅拌后将溶有1.0份对羟基苯甲醛的干燥DMF溶液滴入其中，维持N₂气氛，搅拌后撤去冰浴，在N₂气氛下将混合物加入另一事先溶解有1.0份二甲胺基硫代甲酰氯的干燥DMF溶液，反应混合物以二氯甲烷稀释1.0～2.0倍，所得有机相依次以饱和氯化钠和水洗涤，旋转蒸发抽干二氯甲烷，以柱色谱分离，得白色的中间体A；

2)中间体B的合成：在容器中按摩尔比加入1.0份2，3，3-trimethyl-3H-indole，及3.0份1，4-butane sultone于邻二氯苯溶剂中，溶解，于氮气氛下油浴中加热回流搅拌，反应混合物冷却后倒入冰冻的丙酮中，有黑红色固体析出，以冰冻丙酮洗涤，得呈粉红色粉末的中间体B；

3)目标产物基于部花菁的检测次氯酸的荧光探针的合成：在容器中等摩尔比加入中间体A和中间体B，以乙醇溶解，再加入1.0～3.0份哌啶；混合物在氮气气氛下反应，再旋转蒸发抽干溶剂，固体残余物以柱色谱分离，得橙黄色的目标产物基于部花菁的检测次氯酸的荧光探针。