[发明专利]一种J亚群禽白血病病毒表面蛋白的单克隆抗体及其制备方法无效
| 申请号： | 201110284910.3 | 申请日： | 2011-10-24 |
| 公开（公告）号： | CN102304181A | 公开（公告）日： | 2012-01-04 |
| 发明（设计）人： | 成子强;王峰;张利;王桂花;王玥;于琳琳;姜艳萍;王晓伟;陈洪博 | 申请（专利权）人： | 山东农业大学 |
| 主分类号： | C07K16/10 | 分类号： | C07K16/10;C12N5/20 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 271018 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 亚群禽 白血病病毒 表面 蛋白 单克隆抗体 及其 制备 方法 | ||
1.一种J亚群禽白血病病毒表面蛋白的单克隆抗体，其特征在于：是由保藏号为CGMCC NO 5018的杂交瘤产生的。
2.如权利要求1所述的单克隆抗体的制备方法，其特征在于：该方法是纯化后的原核表达产物His-gp85融合蛋白免疫Balb/C小鼠，经瘤细胞SP2/0与被免疫小鼠的脾细胞融合，筛选和克隆得到禽白血病病毒J亚群表面蛋白的单克隆抗体，简称单抗1。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的筛选方法为：
将纯化后的原核表达产物His-gp85融合蛋白与单抗1在体外结合，采用酶联免疫吸附方法筛选ALV-J His-gp85的单克隆抗体。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的筛选方法为：
将纯化后的原核表达产物His-gp85融合蛋白与单抗1在体外结合，采用转印免疫印迹方法确定与抗体发生结合反应的蛋白分子量，进一步筛选抗ALV-J His-gp85的单克隆抗体。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的筛选方法为：
将ALV-J 中国株WS0705病毒接种DF-1细胞，使单抗1与病毒结合，采用间接免疫荧光筛选抗ALV-J His-gp85的单克隆抗体。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的纯化后的原核表达产物His-gp85融合蛋白是通过如下方法获得的：将ALV-J 中国株WS0705毒株的gp85基因克隆入表达载体pProEXHTB质粒，得到了重组载体pProEXHTB-gp85重组质粒，使用1mmol/L IPTG诱导表达出了带有HIS标签的融合蛋白His-gp85，其分子量为46.3KD，之后采用SDS-PAGE法检测纯化。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述的gp85基因其基因序列如SEQ ID NO.1所示。
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