[发明专利]一种防治黄瓜霜霉病的生防复合菌剂CB28合剂

说明书

技术领域

本发明属于植物保护技术领域，涉及一种防治黄瓜霜霉病的生防复合菌剂CB28合剂。

技术背景

黄瓜是全球十大蔬菜栽培作物之一，在我国“菜篮子”工程中占有重要地位。其叶部病害很多，其中以霜霉病危害最重。因此，研究和防治日光大棚黄瓜病害刻不容缓。在黄瓜叶部病害中，霜霉病是极易发生的，一旦发生，面积大、流行性强，危害严重，防治上难度较大，是黄瓜日光大棚生产中最主要的一大病害。

黄瓜霜霉病是古巴假霜霉菌(Psedoperonspora cubensis(Berkis Curt)Rostov)引起的一种真菌病害，在各地普遍发生。病菌的孢子囊可随风雨、黄瓜甲虫、农器具等进行传播，是一种主要的气传病害；且为专性寄生菌，对寄主植物的专化选择性很强。

随着我国日光大棚面积急剧增加，反季节黄瓜大棚栽培种植大量突现，合适的温湿度等条件，给霜霉病病菌的越冬、传播带来有利条件，一年四季侵染黄瓜，发病严重时，全叶呈黄褐色干枯，最后导致植株干枯早死，缩短收瓜期，严重影响黄瓜产量，损失可达20％到60％，是影响产量的主要制约因素之一。

目前，对日光大棚黄瓜种植而言，控制此病害主要依靠化学药剂，但是其发生期的预测预报精确度不高，很难在防治时间点上适期用药，通常做法是不管发病与否，用药次数急剧增加至每周一次，用药量也急剧增加，药剂种类选择也无法游刃有余，大多是一些保护类化学药剂如霜脲·锰锌wp、唖酮·霜脲氰水分散粒剂、代森锰锌·霜脲氰wp、氟菌·霜霉威悬浮剂等。另外化学药剂的成倍使用，使得农田生态系统易遭到严重破坏，收获后的黄瓜农药残留严重，给人们健康带来不可忽视的严重威胁。同时，化学农药不易降解，高残留，对人、畜的安全性都严重限制了在将来的农业生产上的使用。因此，非化学性防治措施目前已成为防治黄瓜病害的核心方式，而生物防治则为其中最有前途的方法。

由此可见，开发新的、更为高效和安全的微生物杀菌剂控制黄瓜霜霉病是提高社会生产总量的需要，同时更是农业安全及可持续发展的需要，符合社会发展需求。

发明内容

本发明的目的是针对利用生物防治解决农业生产中黄瓜霜霉病防治难度大，成本高，而化学农药抗性日益突出，农药残留高等问题提供一种防治黄瓜霜霉病的生防复合菌剂CB28合剂，该CB28合剂对黄瓜霜霉病防效为62.00％以上。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

一种防治黄瓜霜霉病的生防复合菌剂CB28合剂，含两种有效细菌成分：分别是巨大芽孢杆菌(Bacillus meqaterium)BS13，于2011年04月02日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.4734；肠杆菌(Enterobacter sp.)BJN15，于2011年04月02日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.4733；该合剂中所述的保藏号为CGMCC NO.4734的巨大芽孢杆菌BS13与保藏号为CGMCC NO.4733的肠杆菌BJN15的活菌数量比为1∶1，总活菌总浓度为1×10⁹～10¹⁰cfu/ml。

所述的防治黄瓜霜霉病的生防复合菌剂CB28合剂的制备方法，包含如下步骤：

(1)种子菌液的培养：分别将保藏号为CGMCC NO.4734的巨大芽孢杆菌BS13和保藏号为CGMCC NO.4733的肠杆菌BJN15接种到LB培养液中，在30～32℃、180～220rpm条件下培养至600nm处的OD值为0.5～0.8之间时结束培养，获得种子菌液；

(2)湿菌制备：取步骤(1)中的种子菌液，以1∶250体积比分别加入LB培养液中，30～32℃、180～220rpm振荡培养45～48小时，然后4000rpm离心10～15min，弃上清得湿菌沉淀；

(3)合剂复配：分别取两种湿菌与相应的菌体保藏液按1g∶40ml配成两种细菌单剂，再将两种细菌单剂按照各菌活菌数量(CFU/ml)比1∶1配成合剂。

其中，步骤(3)所述的合剂中活菌总浓度为1×10⁹～10¹⁰cfu/ml。

所述菌体保藏液配制方法为：

1)制备pH 6.8～10，每升含有0.01～0.2mol的无机盐缓冲液或有机盐缓冲液；

2)在上述缓冲液中加入非离子型或天然物表面活性剂，至表面活性剂浓度为0.001～5mol/L即得菌体保藏液。