[发明专利]抑制Nav1.8的短干扰核酸组合物和方法

说明书

本申请是申请日为2005年10月26日，申请号为200580045090.5的、发明名称和本发明相同的发明专利申请的分案申请。

相关专利申请的交叉引用

本申请根据35 USC 119(e)要求于2004年10月27日申请的临时专利申请U.S.S.N.：60/622,484的优先权，其内容作为参考并入本文中。

发明领域

本发明提供单链或双链短干扰核酸，所述干扰核酸可导致Na_v1.8钠通道基因的mRNA发生RNAi诱导的降解；本发明还提供含这种短干扰核酸的药物组合物；含这种短干扰核酸的重组载体；抑制mRNA翻译的方法；抑制多肽表达的方法；阻断细胞膜电位的方法；阻断细胞钠电流的方法；及抑制慢性疼痛的方法。

发明背景

慢性疼痛是由AIDS、癌症化疗、糖尿病或外周神经的直接物理损伤所诱导的外周神经病的主要症状。这种神经性疼痛通常会使人高度衰弱，而且耐受治疗干预。

神经性疼痛的动物模式表明，神经状态维持中的突出特征是外周神经中的感觉传入神经元在损伤后异常的、持续的超兴奋性。此外，一个常见的临床发现是诸如利多卡因这样的广谱钠通道阻断剂，可强烈地抑制神经性疼痛。但仍不清楚各种钠通道亚型在神经性疼痛方面的相对贡献。

电压门控钠通道对在神经元中起始和传播动作电位非常关键。另外，这些通道也参与神经兴奋性的调控。因此，电压门控钠通道在外周和中枢神经系统间传递疼痛信息方面具有重要作用。外周神经损伤可引起钠通道积累在损伤位点周围的初级传入膜上。这导致受损传入及其周围未受损神经元的重复放电以及兴奋性增加。兴奋性的增加在表达神经性疼痛方面是非常关键的。

在脑、神经元和横纹肌中至少鉴定出10种不同的钠通道异构体。钠通道的主要成分是形成通道孔的260kDa的α-亚基。α-亚基由4个同源结构域DI、DII、DIII和DIV组成，每种又含有6个跨膜部分S1-S6。绝大多数钠通道均与辅助型β-亚基β1-β4相连，其平均分子量为30kDa。β-亚基可调控这些通道的表达水平及开关。

在PNS中主要表达3种钠通道异构体，即Na_v1.7、Na_v1.8和Na_v1.9。其中Na_v1.7广泛存在于外周神经系统中，从而在Schwann细胞和神经内分泌细胞中存在于所有类型的背根神经节神经元中。Na_v1.7对纳摩尔量的河豚毒素敏感。Na_v1.8仅存在于感觉传入神经和背根神经节及三叉神经节的神经元中。Na_v1.8通道对河豚毒素高度耐受，IC₅₀高于50μM。Na_v1.9也在背根神经节和三叉神经节的小纤维中表达，而且也耐受纳摩尔浓度的河豚毒素，但半数最大阻断量是约40μM河豚毒素。

最近对寻找治疗疼痛的治疗性靶点的研究集中在在成熟的背根神经节的神经元中所发现的抗河豚毒素的钠通道。已知其一个重要部分是疼痛敏感的“伤害性感受器”。这种钠通道的一种是Na_v1.8，以前被认为是PN3或外周神经钠通道类型3。已发现该通道在慢性疼痛疾病中，在背根神经节中是上调的。另外，Na_v1.8的理化特性使该通道成为在损伤后维持外周神经持续地重复放电的一种可能候选物。另外，Na_v1.8的表达被限制在背根神经节的感觉神经元外周，这表明阻断该通道可能以最小副作用减轻神经性疼痛。但由于目前可获得的钠通道阻断剂不能区分钠通道亚型，因此这种可能性没有进行药理学检测。