[发明专利]海南捕鸟蛛毒素-XXI及其在制备镇痛消炎药物和制备研究TRPV1通道试剂中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种海南捕鸟蛛毒素-XXI及其在制备镇痛药物中的应用和在制备研究TRPV1通道的良好工具试剂中的应用。

背景技术

1997年成功克隆的辣椒素受体即TRPV1是近年来科学家们研究的“热点分子”， 它是机体内一个重要的伤害性感受分子，参与机体内众多生理和病理过程，并与某些疾病的发生有着密切的联系，因此TRPV1是许多新药研发的靶点分子（如镇痛药）。对该通道的研究主要集中在对它的激动剂和拮抗剂的筛选以及与它相关疾病机制方面的研究。由于辣椒素类物质的强烈刺激性，限制了这一类物质的临床应用，因此，开发刺激性小，水溶性强的辣椒素受体相互作用分子成为该通道新药研发的重要方向。

发明内容

本发明旨在提供一种专一性地激活辣椒素受体(TRPV1)通道的海南毒素-XXI。

本发明提供的这种海南毒素-XXI (海南捕鸟蛛毒素-XXI)，其氨基酸序列如下：

Ala Cys Ser Lys Gln Ile Gly Asp Lys Cys Lys Arg Asn Cys Glu

1                5                   10                  15      

Cys Cys Gly Lys Thr Val Val Cys Gly Thr Ile Tyr Val Gly Gly

                 20                   25                 30  

Lys Glu Val Asn Gln Cys Met Asp Lys Thr Ser Asp Asn Ala Ile 

                 35                 40                   45

Lue Asn Gly Lue Gly Lys Gly Met Asn Phe Ile Glu Asn Thr Phe

                 50                 55                   60

Ser Phe Cys Val。

本发明涉及的海南捕鸟蛛毒素-XXI是由64个氨基酸残基组成的多肽,含有8个半胱氨酸及4对二硫键，其相对分子质量是6868.095。该毒素分子的理化性质是：纯化冻干的样品为白色疏松粉末，无气味，易溶解于水，水溶液近于无色透明；膜片钳电生理实验证明该毒素分子能激活辣椒素受体而对电压依赖性的各钠，钾通道亚型没有任何作用，显示良好的专一性，故该毒素分子具有开发成为研究TRPV1通道的良好工具试剂的潜在应用前景。此外，与其它已发现的激活剂相比较，该分子最大的特点就是能持续地激活TRPV1通道，使钙离子内流细胞长时间兴奋从而对外界刺激不再敏感，因此该分子具有镇痛消炎的效果。

附图说明

图1是海南捕鸟蛛粗毒的RP-HPLC色谱图，星号所标记的为目标分子所在的组份。

图2是粗毒活性组份的进一步RP-HPLC（分析型），箭头所示为海南捕鸟蛛毒素-XXI的色谱峰。

图3是海南捕鸟蛛毒素-XXI的质谱鉴定图谱。

图4是海南捕鸟蛛粗毒对辣椒素受体的激活作用。

图5是海南捕鸟蛛毒素-XXI激活辣椒素受体，产生能被钌红阻断的钙电流，并呈现浓度依赖性。

图6是海南捕鸟蛛毒素-XXI能持久地激活辣椒素受体。

图7是海南捕鸟蛛毒素-XXI对TTX-R,Kv2.1和Kv4.2的抑制作用。

具体实施方式

发明过程所涉及的材料，仪器，方法和结果（结合附图具体说明）

1. 海南捕鸟蛛毒素-XXI的分离纯化，质谱鉴定及序列确定。

1.1 粗毒采集

在一个固定的铁架台上，用50 ml EP管作为毒液接收器，用大镊子从侧面夹住海南捕鸟蛛的腹部，使蜘蛛张开螯爪并伸入管中，然后用5～10 V的脉冲电压刺激两螯肢基部外侧3～5s。蜘蛛感受电刺激后，即用触肢紧紧抱住管壁，同时将螯爪有力刺向管内壁并射出毒液。毒液用微量注射器抽取收集后，放入-40℃冷冻干燥机中经真空冷冻干燥成浅黄色粉末即为粗毒。

1.2 反相HPLC分离纯化与制备