[发明专利]一种超临界CO2体系中用脂肪酶膜制备富含中链脂肪酸的玉米油的方法

权利要求书

1.一种以二氧化碳为溶剂，在超临界体系中采用脂肪酶膜催化制备富含中链脂肪酸的玉米油的方法，其特征步骤如下：

步骤一：复合膜的制备：将5g醋酸纤维素溶于100ml丙酮中，待溶解完全成均一的膜液后，取实验前制备好的聚丙烯膜浸于溶有醋酸纤维素的丙酮溶液中，自然成膜，以去离子水冲洗醋酸纤维素/聚丙烯复合膜数次干燥备用。

步骤二：高碘酸钠氧化法：取一张醋酸纤维素/聚丙烯复合膜悬浮于10ml不同浓度的高碘酸钠溶液中，室温下置于摇床中摇动一定时间，取出立即用去离子水洗至中性，吸干水分，与酶的磷酸盐缓冲溶液于28℃进行交联反应。交联反应后取出，悬浮于10ml 1％氢硼化钠溶液中于4℃反应30min，然后用0.1mol的HAI溶液、2mol的KCl溶液和水分别洗涤三次，取出测定酶活。

步骤三：脂肪酶的固定化：取若干份1cm²的醋酸纤维素/聚丙烯复合膜于三角瓶中，分别加入一定量的脂肪酶酶液和pH 8.0的磷酸氢二钠/磷酸二氢钾缓冲液，在温度4℃下，加入0.24％戊二醛进行交联交联反应186min，反应结束后取出酶膜，用去离子水冲洗，放于干燥处待其风干后测定酶活为0.52U/cm²。

步骤四：在不锈钢高压釜中按1∶1～4∶1的摩尔比例加入辛酸和玉米油，同时加入一定量的脂肪酶膜，再加入搅拌磁珠；向不锈钢高压釜中H₂置换不锈钢高压釜中的空气；将充入气体的不锈钢高压釜进行试漏；排空不锈钢高压釜中的氢气，同时充入CO₂，其压力为11MPa；将不锈钢高压釜放入一定温度的恒温水浴锅中预热一段时间；将不锈钢高压釜放入恒温水浴锅中，在恒温恒压的条件下开动磁力搅拌器；反应结束后将不锈钢高压釜冷却至室温，放出气体，打开不锈钢高压釜，取出得到的反应产物；将取出的反应产物置于离心机中离心，取出上清液后即得产品。

经气相分析，反应产物的脂肪酸组成中，具有生理活性的中链脂肪酸含量高达35.00％，增强了玉米油的功能特性。本发明采用超临界CO₂状态下酶膜法合成富含辛酸甘油酯的玉米油，可大大降低酶反应过程的传质阻力，提高酶反应速率，最重要的是控制了反式脂肪酸的生成。

步骤五：选择脂肪酶膜添加量分别为1％～6％，过程同步骤四，确定固定化脂肪酶膜的添加量；

步骤六：选择反应温度分别为50～90℃，过程同步骤四，确定制备富含中链脂肪酸玉米油的反应温度。

步骤七：选择反应时间分别为12～36h，过程同步骤四，确定制备富含中链脂肪酸玉米油的反应时间。

步骤八：选择反应压力分别为8～15h，过程同步骤四，确定制备富含中链脂肪酸玉米油的反应压力。

2.根据权利要求1所述的一种以二氧化碳为流体，在超临界体系中采用脂肪酶膜催化甘油解反应制富含中链脂肪酸玉米油的方法，其特征在于步骤四中辛酸和玉米油以1∶1～3∶1的摩尔比加入到150mL不锈钢高压釜中。

3.根据权利要求1所述的一种以二氧化碳为流体，在超临界体系中采用脂肪酶膜催化甘油解反应制备富含中链脂肪酸玉米油的方法，其特征在于步骤五中脂肪酶膜添加量为2.5％～5.5％。

4.根据权利要求1所述的一种以二氧化碳为流体，在超临界体系中采用脂肪酶膜催化甘油解反应制备富含中链脂肪酸玉米油的方法，其特征在于步骤六应温度分别为60～80℃。

5.根据权利要求1所述的一种以二氧化碳为流体，在超临界体系中采用脂肪酶膜催化甘油解反应制备富含中链脂肪酸玉米油的方法，其特征在于步骤七中反应时间分别为16～30h。

6.根据权利要求1所述的一种以二氧化碳为流体，在超临界体系中采用脂肪酶膜催化甘油解反应制备富含中链脂肪酸玉米油的方法，其特征在于步骤八中反应压力分别为10～13h。