[发明专利]一种水环境微生物鉴定方法

权利要求书

1.一种水环境微生物鉴定方法，包括如下步骤：

(1)提取底泥中的微生物DNA，

(2)用采用通用引物对GC-F338和R518，PCR扩增目的片段，

所述引物GC-F338：5′-CGC CCG CCG CGC GCG GCG GGC GGG GCG GGG GCA CGG GGG GTAC GGG AGG CAG CAG-3′，

R518：5’-ATT ACC GCG GCT GCT GG-3’；

(3)DGGE电泳分离PCR产物，

(4)DGGE条带的切胶回收后重新PCR，所述引物为F338和R518，

所述引物F338：5’-TAC GGGAGG CAG CAG-3′，

R518：5’-ATT ACC GCG GCT GCT GG-3’；

(5)回收二次PCR产物，与表达载体连接，转化，培养，提取质粒，PCR检测，

(6)阳性质粒测序，确定所含微生物的种类。

2.根据权利要求1所述的方法，所述表达载体为Pmd18-T载体。

3.根据权利要求1所述的方法，所述转化所用生物体为DH5α感受态细胞。

4.根据权利要求1所述的方法，所述PCR检测中所述引物为M13-47和RV-M，

所述引物M13-47：5′-CGC CAG GGT TTT CCC AGT CAC GAC-3′，

RV-M：5′-GAG CGG ATA ACA ATT TCA CAC ACA AGG-3′。