[发明专利]抗白斑综合征病毒的转基因藻株及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种抗白斑综合征病毒的转基因藻株，其特征在于：将白斑综合征病毒囊膜基因插入到真核表达载体中，构建的重组质粒转化至盐藻细胞中得到转基因藻株。

2.根据权利要求1所述的抗白斑综合征病毒的转基因藻株，其特征在于：所述的白斑综合征病毒的囊膜基因为VP28基因、VP19基因或由VP28基因与VP19基因构成的融合基因。

3.根据权利要求1所述的抗白斑综合征病毒的转基因藻株，其特征在于：所述的真核表达载体为能够转化至盐藻细胞中的载体，并在盐藻细胞中得以表达。

4.一种如权利要求1-3中任一项所述抗白斑综合征病毒的转基因藻株的制备方法，其特征在于：所述的制备方法如下：

1）WSSV囊膜蛋白基因的制备：取感染WSSV的病料利用低温超速离心法进行病毒的提纯，得到完整WSSV，采用病毒核酸提取试剂盒提纯病毒核酸，根据vp28与vp19的序列分别设计特异性引物，以病毒核酸作为模板，采用PCR方法分别扩增出VP28、VP19和VP28+VP19融合基因基因片段；

2）含有WSSV囊膜基因的真核表达载体的构建：将克隆得到的囊膜蛋白基因VP28、VP19和VP28+VP19基因片段分别与克隆载体连接，通过酶切鉴定和测序鉴定后获得正确的基因序列，然后将该序列连接到真核表达载体pBI-上，经酶切鉴定正确后，成功构建转化盐藻细胞的真核表达载体；

3）将构建好的重组载体转化盐藻细胞：将构建好的重组质粒通过玻璃珠转化法、基因枪法、电击法、脂质体介导法或超声波导入法转化盐藻细胞，转化后经选择培养基筛选培养，获得阳性转化株；

4）稳定表达WSSV囊膜基因转化藻株的筛选与鉴定：提取转基因藻株的基因组DNA和RNA，对目的基因进行PCR和RT-PCR扩增，以期鉴定目的基因整合与表达状态，并利用western blot技术对表达产物进行活性和产量的分析。

5.一种如权利要求1-3中任一项所述抗白斑综合征病毒的转基因藻株作为药物在预防或治疗白斑综合征病毒中的应用。

6.一种如权利要求1-3中任一项所述抗白斑综合征病毒的转基因藻株作为饲料及饲料添加剂在甲壳类动物养殖中的应用。

7. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述的甲壳类动物为甲壳类物种，包括通常称为“虾”、“螃蟹”、“龙虾”、“蝲蛄”和其它甲壳类动物。