[发明专利]一种桔黄假单胞菌菌剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物和化学领域，公开了一种农用促生菌剂，具体地说是一种植物根际促生菌桔黄假单胞菌菌剂的制备方法。

背景技术

我国是农业大国，通过使用化肥以提高农作物的产量，长期和大量施用化肥会造成水体富营养化、土壤物理性质恶化，危害食品安全、甚至人类生命健康。

微生物肥料菌剂是由一种或数种有益活体微生物制备而成的肥料，借助其代谢过程或代谢产物，以改善植物生长条件，尤其是营养环境，达到促进植株生长的作用。微生物肥料菌剂是一种保护生态环境、提高农作物产量和品质的好方法。假单胞菌是一种植物根际促生菌(Plant Growth-promoting Rhizobacteria，PGPR)，能够通过多种方式促进植物生长，包括：抑制植物病原菌、分泌吲哚乙酸(IAA)、产生铁载体等直接或间接的作用促生作用。

现有阶段发现桔黄假单胞菌对多种植物致病菌有抑制作用(Rosas BS等，Phyton-Revista Internacionalde Botanica Experimental，2001，67：203-209)；Rosas和Rovera等人(Carlier E，Rovera M等World J Microbiol Biotechnol，2008，24：2653-2658)研究发现，桔黄假单胞菌SR1通过产生铁载体、拮抗蛋白、氢氰酸(HCN)、植物激素类似物等来抑制植物病原菌、促进植物的生长。Feklistova和Maksimova(Feklistova IN等，Bulletin of BSU，chemistry，biology，Geography，2005，2：29-31)发现，桔黄假单胞菌还能合成吩嗪类物质(phenazines)起到生物防治的作用。

现有研究发现一株桔黄假单胞菌JD37(菌种保藏号CGMCCNo.1.10967)对多种植物致病菌有抑制作用，并且能够通过直接或者间接促生作用促进玉米、小麦和番茄植株的生长。所以发明一种对人畜无毒、生态环境友好、能促进植物生长的桔黄假单胞菌菌剂对于保护环境、促进植物生长和农业发展有着重要的意义。

发明内容

本发明的目的是：提供一种既能对植物有促生作用，提高植株产量，又对环境无污染，同时制备简单、使用方便的桔黄假单胞菌菌剂的制备方法。

本发明的技术方案为，一种桔黄假单胞菌菌剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)将桔黄假单胞菌JD37菌株接种入液体培养基中，25～30℃下培养24～28小时；离心沉淀取桔黄假单胞菌JD37菌体，与灭菌的0.05wt％～0.2wt％助剂溶液悬浮，混合均匀，得到悬浮菌液；

液体培养基为KB培养基；

离心条件为-8～0℃，优选-4℃，6000～10000rpm离心8～15分钟；

助剂优选为羧甲基纤维素钠；助剂溶液浓度优选为0.1wt％；

获得菌体的液体培养基与助剂溶液体积比为200～300∶1，即：平均每200～300毫升菌液离心后得到的桔黄假单胞菌JD37菌体，与1毫升助剂溶液混合制备悬浮菌液。

(2)将悬浮菌液与灭菌的载体混合，载体与悬浮菌液的体积质量比为3～6g/ml，优选为5g/ml。载体可选用滑石粉或硅藻土，优选为滑石粉。

通过上述方法制备的桔黄假单胞菌JD37菌剂可用作微生物肥料，菌体释放能力高，可防治植物病害，促进作物生长。

桔黄假单胞菌JD37菌剂通过降低植株发病率，达到促进作物生长的效果。桔黄假单胞菌菌剂作为活体微生物肥料的应用价值在于：

(1)桔黄假单胞菌菌剂的菌体释放能力高。

(2)能通过直接或间接的促生方式，促进作物生长。

对作用施用桔黄假单胞菌活体微生物肥料，并在整个生长过程中多次施用，可以显著促进植株根的生长，进而促进整株作物的生长。

(3)抑制植物病原真菌：通过离体叶片实验，桔黄假单胞菌活体微生物肥料能够显著抑制植物病原菌，增强植株抵抗植物病原的能力，起到预防和防治植物病原菌的效果。无毒、无副作用，人畜安全。

(4)农药开发成本低：桔黄假单胞菌活体微生物菌剂的活性成分是桔黄假单胞菌，该菌具有易培养、易收集、对人体及动植物无害的特点，加工促生菌剂选用的载体及助剂材料价格低廉，制备工艺简单易行。

(5)菌剂的使用方法操作简单：桔黄假单胞菌菌剂为干粉状，使用前按一定比例加水稀释，采用浇灌和喷晒的方式施用均可。

附图说明