[发明专利]一种siRNA 转染哺乳类动物胚胎的电穿孔方法

权利要求书

1.一种siRNA转染胚胎的电穿孔方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将待转染的胚胎置于台氏液中，室温孵育5～15s，然后终止消化并清洗；

2)以opti-MEM为电转缓冲液进行稀释，用稀释好的待转染siPORT^TM与siRNA按摩尔比1∶1～2混合后室温静置10～15min，得到含有siRNA的电穿孔溶液，其中siRNA的终浓度为0.1～1μmol/L；

3)将胚胎置于含有siRNA的电穿孔溶液，在脉冲电场下，利用电穿孔法对胚胎进行siRNA转染。

2.如权利要求1所述的siRNA转染胚胎的电穿孔方法，其特征在于，将胚胎在进行台氏液处理之前，还对胚胎用PBS-PVA溶液清洗，所述的PBS-PVA溶液为含有体积浓度为0.2～0.5％PVA的PBS溶液。

3.如权利要求1所述的siRNA转染胚胎的电穿孔方法，其特征在于，所述的终止消化是将胚胎从台氏液转移到含血清的胚胎体外操作液中终止消化，然后将胚胎用opti-MEM溶液清洗。

4.如权利要求1所述的siRNA转染胚胎的电穿孔方法，其特征在于，所述的siRNA为进行了荧光标记的siRNA。

5.如权利要求1所述的siRNA转染哺乳类动物胚胎的电穿孔方法，其特征在于，电穿孔法进行siRNA转染的参数控制为：电压20～40V；脉冲时间1～2ms；脉冲次数2～4次。

6.如权利要求1所述的siRNA转染哺乳类动物胚胎的电穿孔方法，其特征在于，电穿孔完成后，将胚胎清洗并转移入提前平衡至少30min的胚胎培养液中培养。