[发明专利]利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种去除燕窝中亚硝酸盐的方法，特别涉及一种利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法与应用，属于生物技术领域。 

背景技术

燕窝是雨燕科(Apodidae)金丝燕属(Collocalia)的多种鸟类分泌出的唾液与绒羽、杂草等粘结而筑成的巢窝，经去除绒羽、杂草等杂质即为商品燕窝。现代研究表明，燕窝不仅可作为补充蛋白质、氨基酸的滋补品，而且含有一些活性蛋白，具有抑制血凝、促进细胞分裂、延缓脑组织衰老、提高免疫等功效。因此，燕窝是家喻户晓的药食两用高级滋补品，常用于补肺养阴、补中益气、润燥泽枯、化痰止咳，主治肺痨、咳嗽、咯血、虚损、痰喘等症。 

在鸟类筑巢、毛燕窝除杂、商品燕窝贮存等过程中，难免与一些微生物接触，由于微生物对燕窝中蛋白质、氨基酸的分解代谢作用，会产生亚硝酸盐，以致燕窝含有一定量的亚硝酸盐。我国《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》(GB2760-2011)严格规定，亚硝酸盐的限量为30mg/kg，但是，在毛燕窝制作为商品燕窝的传统生产中，燕窝中的亚硝酸盐往往会超过国家标准。因此，在燕窝生产过程中或在燕窝食用前，需去除亚硝酸盐。 

如果采用简单的浸泡或超声波清洗技术进行去除燕窝中亚硝酸盐，往往去除不彻底，去除率最多不超过50％；如果采用化学方法进行去除燕窝中亚硝酸盐，往往会有化学药品残留问题。 

目前，未有生物法去除燕窝中亚硝酸盐的相关报道。 

发明内容

本发明首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法，使亚硝酸盐去除过程具有安全性与高效性。 

本发明的另一目的在于提供所述的利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕 窝中亚硝酸盐的方法的应用。 

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法，是将具有去除亚硝酸能力、可食用的微生物制备的微生物活菌悬液或是将具有去除亚硝酸能力、可食用的微生物制备的粗酶液中的一种或两种，与燕窝混合，振荡处理，洗涤燕窝，得到去除亚硝酸盐的燕窝； 

所述的具有去除亚硝酸能力、可食用的微生物优选为粘红酵母或深红酵母中的一种或两种； 

所述的粘红酵母优选为粘红酵母CICC31229(中国工业微生物菌种保藏中心)； 

所述的深红酵母优选为深红酵母CICC32918(中国工业微生物菌种保藏中心)； 

所述的微生物活菌悬液为对微生物直接培养得到的微生物活菌悬液或是将冻干保存的微生物悬浮于培养基中得到的微生物活菌悬液； 

所述的粗酶液优选通过如下步骤制备得到：将具有去除亚硝酸能力、可食用的微生物进行超声波破碎细胞，低温离心，去除菌体，得到上清液即为粗酶液；由于具有去除亚硝酸能力、可食用的微生物含有能降解亚硝酸盐的酶，低温离心，能有效保存能降解亚硝酸盐的酶的活性，因此，将此粗酶液与燕窝混合，经振荡处理，可有效去除燕窝中的亚硝酸盐； 

所述的超声波破碎的条件优选为功率200～250w、超声10s、间歇10s、超声60～120次； 

所述的振荡处理的条件优选为28～32℃、150～250r/min振荡1～9h； 

所述的利用微生物活菌悬液和/或粗酶液去除燕窝中亚硝酸盐的方法，更优选包含以下步骤： 

(1)培养基的制备：将麦芽汁的pH值调节为4.0～4.5，灭菌，得到培养基； 

(2)制备活菌悬液：活菌悬液为通过直接培养制备得到活菌悬液或是采用活性干酵母制备得到活菌悬液； 

直接培养制备得到活菌悬液的步骤如下：将具有去除亚硝酸能力的粘红酵母或深红酵母接入步骤(1)制备的培养基中，培养至对数期，得到活菌悬液； 

采用活性干酵母制备得到活菌悬液的步骤如下：将直接培养所得的活菌悬液进行低温离心分离菌体，收集湿菌体，加入冻干保护剂，真空冷冻干燥，获得活性干酵母；使用时，将活性干酵母投入步骤(1)所得的培养基中，得到活 菌悬液； 

(3)制备粗酶液：粗酶液为破碎菌体制备得到粗酶液或是将粗酶干粉投入缓冲液制备得到粗酶液； 

破碎菌体制备得到粗酶液的步骤如下：将步骤(2)制备的活菌悬液进行低温离心分离菌体，收集湿菌体，加入0.05～0.1mol/L、pH3.5～4.0磷酸盐缓冲溶液，重新配制成活菌悬液，置于冰水浴中，超声波破碎细胞，破碎后进行低温离心分离菌体碎片，收集上清液，得到粗酶液；