[发明专利]一种赖氨酸芽孢杆菌（Lysinibacillus sp.）GY32及其应用

说明书

技术领域：

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)GY32 及其在降解十溴联苯醚中的应用。

背景技术：

多溴联苯醚(polybrominated diphenyl ethers，PBDEs)是一种持久性有机污染物，因具 有优良的阻燃性能而被广泛应用于电子电器产品中。近年来随着电子电器行业的迅猛发展， 大量电子垃圾的无序拆解，具有生态生理毒性和生物积蓄毒性的PBDEs释放到水体土壤环境 中，对生态环境和生物体健康都造成了严重的影响和危害。面对多溴联苯醚污染造成的生态 环境问题，人们积极探索各种解决方法。合适的微生物处理法可以实现污染物的彻底无毒化， 是较为理想的污染物处理途径。具有多溴联苯醚降解功能的微生物的获得无疑给这些污染问 题的解决带来了曙光。

Lysinibacillus属是2007年从Bacillus属分离出来的新属，仅有三个分类种。该属的菌种 革兰氏染色阳性，能形成椭圆或圆形芽孢。氧化酶和过氧化氢酶试验阳性，硝酸盐还原、产 H₂S和吲哚试验阴性。主要脂肪酸类型为iso-C_15:0，主要醌型为MK-7，细胞壁肽聚糖含Lys 和Asp，DNA中(G+C)mol％为35-38％。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供一种赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)GY32，该菌于2011 年9月7日保存于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国武汉市武汉大学，保藏编 号为CCTCC NO：M 2011307。

本发明的赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)GY32是通过对广东汕头某电子垃圾集中 处理区的河床底泥进行富集培养、分离、纯化，得到Lysinibacillus属的一个新种。

赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)GY32的形态学和生理生化特征：

该菌24h平板培养物菌落圆形、乳黄色，突出培养基，不透明，边缘有一圈半透明刺突 状，直径2-3mm，放大12倍观察菌落呈半圆结晶状。菌体革兰氏阳性，能形成椭圆或圆形芽 孢，周生鞭毛。对数生长期及稳定期前期会呈现出宽0.8-1.34μm、长大于29.87μm长线状或 大于5μm的长杆状菌体形态，至今尚未发现其他多溴联苯醚降解微生物具有如此特殊的形态 特征，24h后与普通杆状细胞无明显差异。氧化酶和过氧化氢酶阳性，V-P试验阴性。该菌能 在好氧和兼性厌氧条件下生长，生长pH6.0～9.0，生长温度15～45℃。

赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)GY32的分子分类学地位：

按照常规方法提取赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)GY32的总DNA。采用16S rRNA 通用引物27F和1492R扩增其16S rRNA基因，将PCR产物直接测序，获得16S rRNA基因 序列，其序列如SEQ ID NO.1所示。将该序列与NCBI的GenBank中序列进行比对，进行 BLAST分析，结果发现赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)GY32的16S rRNA基因序列与 Lysinibacillus属的已有模式菌株具有较高的相似性，其中与Lysinibacillus sphaericus的序列相 似性为98％。再扩增其gyrB基因，将PCR产物直接测序，获得gyrB基因序列，其序列如 SEQ ID NO.2所示，经BLAST分析，与其相似性最大的已公开发表序列为Lysinibacillus sphaericus C3-41，但相似度仅为81％，文献资料显示同一菌种的gyrB基因序列的同源性应 大于95％。

综合上述形态学、生理生化特征和分子分类学结果，认为赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)GY32属于Lysinibacillus属的一个新种，定名为赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)GY32， 于2011年9月7日保存于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：中国武汉市武汉大学， 保藏编号为CCTCC NO：M 2011307。