[发明专利]一种定量检测6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（MPT-NAG）的检测方法及试剂

权利要求书

1.一种定量检测6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)的检测方法，其特征在于包括如下步骤：

1)配制含有MgCl₂、EDTA·2Na、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶、聚乙二醇6000、乙二醇、蔗糖的pH4.0-5.0柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液；

2)加入含MPT-NAG的待测样品，反应一段时间，试剂中的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶将MPT-NAG催化分解产生6-甲基-2巯基吡啶(MPT)和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖；

3)通过测定特定波长下溶液的吸光度值，计算出待测样品中MPT-NAG的含量。

2.根据权利要求1所述的一种定量检测6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)的检测方法，其特征在于：步骤(1)中所述pH4.0-5.0柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液的浓度为30-500mmol/L、MgCl₂浓度为2-20mmol/L、EDTA·2Na浓度为0.5-10mmol/L、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶浓度为5-20KU/L、聚乙二醇6000浓度为2-10g/L、乙二醇浓度为20-100ml/L、蔗糖浓度为5-50g/L。

3.根据权利要求1所述的一种定量检测6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)的检测方法，其特征在于：步骤(2)中的反应条件为在37℃环境中反应5-10min。

4.根据权利要求1所述的一种定量检测6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)的检测方法，其特征在于：步骤(2)反应中生成的6-甲基-2巯基吡啶(MPT)分别在205nm、270nm、340nm处有最大吸收。

5.据权利要求1所述的一种定量检测6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)的检测方法，其特征在于：样品中MPT-NAG的计算公式为：样品液MPT-NAG含量(mmol/L)＝(A_u-A₀)×V₁×10³/(ε×V₂)，其中A_u为样品管反应吸光度值，A₀为同体积的去离子水代替样品所测得的吸光度值，V₁为总反应体积，V₂为样品体积，ε为特定波长下MPT-NAG的摩尔吸光值。

6.一种用于权利要求1-5中任一项所述的检测方法的检测试剂，其特征在于：含有pH4.0-5.0柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液中柠檬酸-柠檬酸三钠浓度为30-500mmol/L，MgCl₂浓度为2-20mmol/L、EDTA·2Na浓度为0.5-10mmol/L、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶浓度为5-20KU/L、聚乙二醇6000浓度为2-10g/L、乙二醇浓度为20-100ml/L、蔗糖浓度为5-50g/L，待测样品的浓度为0.005-16.5g/L。