[发明专利]鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒的引物对及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒的引物对及其应用。

背景技术

禽流感和新城疫分别是由禽流感病毒和新城疫病毒引起的两种病毒性传染病。两种传染病发病急，传播快，发病率高，对养殖业可造成致命性的打击。流行于我国鸡群的禽流感病毒的亚型主要为H5和H9亚型。流感病毒极易发生基因变异，从而导致抗原性的改变。因此，虽然我国已全面采取免疫措施，但H5和H9亚型流感病毒仍然在鸡群中反复发生。H5和H9亚型禽流感病毒基因和抗原特性的变异，导致常规血清学方法及分子生物学监测方法无法检出流行毒株，因此需要建立一种能够检出当前流行毒株的通用性良好的检测方法。此外，流行病学调查表明，我国大部分地区鸡群存在H3亚型流感病毒的血清阳性抗体，且有从鸡群中分离到H3亚型禽流感病毒的报道，因此，H3亚型禽流感病毒也应作为流感病毒监测的对象之一。近年来，新城疫病毒和禽流感病毒引起鸡群发病的临床症状趋于相似，无法用常规临床诊断方法进行确诊，迫切需要建立一种检测方法用于新城疫和禽流感的鉴别诊断。

对于传统的检测方法，如病毒分离、血凝抑制试验、神经氨酸酶试验等，费时、费力，不能做出快速而及时的诊断；而且不能在同一检测反应中检测不同的对象，即无法同时进行鉴别诊断。RT-PCR方法具有敏感性高、特异性好、省时等特点，而且多重RT-PCR方法可以在一个反应中同时检测多种病原。目前，国内外还没有能够同时检测新城疫和H3、H5、H9亚型禽流感病毒的多重RT-PCR方法。因此，临床上，迫切需要一种能快速鉴别诊断新城疫和不同亚型禽流感病毒的检测方法，不但能够确定病毒是否为新城疫病毒或禽流感病毒，还能够确定禽流感病毒的亚型，而且对当前的流行毒株具有很好的检测覆盖性。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒的引物对及其应用。

本发明所提供的鉴定新城疫病毒和多亚型禽流感病毒的引物对为PCR引物对组合物A，是下述1)-4)中的任意一种：

1)所述PCR引物对组合物A由如下4个引物对组成：引物对NDV、引物对H3V、引物对H5V和引物对H9V；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒、H5亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒中的至少一种；

所述引物对NDV、引物对H3V、引物对H5V和引物对H9V均由两条单链DNA组成；

所述引物对NDV为序列表中序列1所示的单链DNA和序列表中序列2所示的单链DNA组成的引物对；

所述引物对H3V为序列表中序列3所示的单链DNA和序列表中序列4所示的单链DNA组成的引物对；

所述引物对H5V为序列表中序列5所示的单链DNA和序列表中序列6所示的单链DNA组成的引物对；

所述引物对H9V为序列表中序列7所示的单链DNA和序列表中序列8所示的单链DNA组成的引物对；

2)所述PCR引物对组合物A由如下3个引物对组成：所述引物对NDV、引物对H3V和引物对H5V；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒和H5亚型禽流感病毒中的至少一种；

3)所述PCR引物对组合物A由如下3个引物对组成：所述引物对NDV、引物对H3V和引物对H9V；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒中的至少一种；

4)所述PCR引物对组合物A由如下3个引物对组成：所述引物对NDV、引物对H5V和引物对H9V；所述多亚型禽流感病毒为H5亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒中的至少一种。

本发明还提供一种鉴定或辅助鉴定多亚型禽流感病毒的PCR引物对组合物B，是下述5)-8)中的任意一种：

5)所述PCR引物对组合物B由如下3个引物对组成：所述引物对H3V、引物对H5V和引物对H9V；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒、H5亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒中的至少一种；

6)所述PCR引物对组合物B由如下2个引物对组成：所述引物对H3V和引物对H5V；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒和H5亚型禽流感病毒中的至少一种；

7)所述PCR引物对组合物B由如下2个引物对组成：所述引物对H3V和引物对H9V；所述多亚型禽流感病毒为H3亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒中的至少一种；

8)所述PCR引物对组合物B由如下2个引物对组成：所述引物对H5V和引物对H9V；所述多亚型禽流感病毒为H5亚型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒中的至少一种。