[发明专利]一种6-羟基硫双萍蓬草定碱的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物提取技术领域，涉及一种6-羟基硫双萍蓬草定碱的制备方法。

背景技术

6-羟基硫双萍蓬草定碱（Hydroxythiobinupharidine）分子式为C₃₀H₄₂N₂O₃S，分子量为510.74。CAS登录号为50478-55-2。是从睡莲科（Nymphaeaceae）植物黄萍蓬草Nuphar luteum(L.)J.E.Smith根茎、萍蓬草Nuphar pumilum(Timm.)DC.根茎中分离得到的一种萜类生物碱。萍蓬草根茎甘平无毒，具有清热滋补、补虚健胃、止血通经等功效，用于治疗病后体弱、神经衰弱、消化不良、月经不调、刀伤等症。其主要化学成分为生物碱。药理研究表明，6-羟基硫双萍蓬草定碱具有较强的免疫抑制活性，在浓度为1μM时，对小鼠脾细胞的斑块形成细胞（plaque forming cell）有显著的抑制活性，而在此浓度下对小鼠脾细胞无细胞毒性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作简便、分离量大、样品损失少、产品含量高的快速制备6-羟基硫双萍蓬草定碱的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种6-羟基硫双萍蓬草定碱的制备方法，其特征在于包括以下步骤：将干燥的萍蓬草根茎粉碎后用质量分数1-5%的酸性水溶液室温浸泡提取，浸提液过滤上强酸性阳离子交换树脂，待饱和吸附后，用碱性甲醇溶液洗脱，合并洗脱液，浓缩得浸膏，所得浸膏经高速逆流色谱法分离得到纯度98%以上的6-羟基硫双萍蓬草定碱。

所述酸性水溶液为盐酸水溶液、硫酸水溶液或磷酸水溶液。

所述强酸性阳离子交换树脂为732型阳离子交换树脂、D001型阳离子交换树脂、HZ002型阳离子交换树脂或JK006型阳离子交换树脂。

所述碱性甲醇溶液为70-85%甲醇水溶液（含氨水0.4-0.7%）。

所述高速逆流色谱纯化：以乙醚-二氯甲烷-磷酸盐缓冲液为溶剂系统，体积比为（15-20）：（18-25）：（5-10），以上相为固定相，下相为流动相。

本发明的优势在于：本发明避免了使用大量有机溶剂，酸水溶液可循环使用，大大降低了提取成本，浸提液通过离子交换树脂，用碱性醇溶液洗脱，降低了有机溶剂的使用量和损耗；采用高速逆流色谱法分离纯化，分离效果好，产品无损失、纯度高。

具体实施方式

下面结合实施例详细说明本发明的技术方案，但保护范围不被此限制。

实施例1：

将1000g萍蓬草根茎粉碎成粗粉投入提取罐中，加入12倍药材量的质量分数为2%的盐酸水溶液，室温浸泡提取2小时，将浸提液过滤上HZ002型阳离子交换树脂柱，下柱液用于继续浸泡萍蓬草根茎粗粉，浸提液再上阳离子交换树脂柱，至浸出液生物碱呈阴性反应，待阳离子交换树脂柱饱和吸附后，用6BV70%的甲醇水溶液（含氨水0.6%）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩成浸膏。

采用乙醚-二氯甲烷-磷酸盐缓冲液溶剂系统分离纯化萍蓬草浸膏，体积比为17.5:23:6，以上相为固定相，下相为流动相，根据色谱图收集相应组分，调pH至8.5，用二氯甲烷萃取，回收二氯甲烷，得到纯度98%以上的6-羟基硫双萍蓬草定碱。

实施例2：

将1000g萍蓬草根茎粉碎成粗粉投入提取罐中，加入15倍药材量的质量分数为1%的磷酸水溶液，室温浸泡提取3小时，将浸提液过滤上D001型阳离子交换树脂柱，下柱液用于继续浸泡萍蓬草根茎粗粉，浸提液再上阳离子交换树脂柱，至浸出液生物碱呈阴性反应，待阳离子交换树脂柱饱和吸附后，用6BV75%的甲醇水溶液（含氨水0.4%）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩成浸膏。

采用乙醚-二氯甲烷-磷酸盐缓冲液溶剂系统分离纯化萍蓬草浸膏，体积比为15:24:8，以上相为固定相，下相为流动相，根据色谱图收集相应组分，调pH至8.0，用二氯甲烷萃取，回收二氯甲烷，得到纯度98%以上的6-羟基硫双萍蓬草定碱。

实施例3：

将1000g萍蓬草根茎粉碎成粗粉投入提取罐中，加入10倍药材量的质量分数为3%的硫酸水溶液，室温浸泡提取2.5小时，将浸提液过滤上JK006型阳离子交换树脂柱，下柱液用于继续浸泡萍蓬草根茎粗粉，浸提液再上阳离子交换树脂柱，至浸出液生物碱呈阴性反应，待阳离子交换树脂柱饱和吸附后，用7BV80%的甲醇水溶液（含氨水0.7%）洗脱，收集洗脱液，减压浓缩成浸膏。