[发明专利]一种从千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种从千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的方法。

背景技术

蔓性千斤拔素A（flemiphilippinin A）为黄酮类物质，分子式：C30H32O6，分子量：488，结构式：

研究发现，蔓性千斤拔素A具有较强清除人体自由基作用和抗肿瘤作用。

千斤拔，别名蔓性千斤拔、一条根、钻地风等。为豆科千斤拔属植物千斤拔，以根入药。具有祛风利湿，消瘀解毒功效。

通过文献检索，未发现有制备蔓性千斤拔素A专一方法。如文献“蔓性千斤拔总黄酮的提取与分析”，该文献研究的包括蔓性千斤拔素A在内的多种黄酮混合物提取方法。再如文献“千斤拔异戊烯基黄酮研究”和文献“千斤拔化学成分研究”以及文献“蔓性千斤拔化学成分与质量控制研究”，都是以多种成分为研究对象，采用萃取和固体填充柱分离。如上所述，这些传统制备方法多存在溶剂用量大、收率低、制备量小、污染严重、能耗高等诸多缺陷，不利于蔓性千斤拔素A应用和更广泛的药理研究。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺陷和不足，提供一种从千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的快速、简便的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种从千斤拔中萃取蔓性千斤拔素A的方法，其特征在于以下步骤：

a取千斤拔药材粉碎40-80目，加入超临界萃取釜中，在萃取压力20-30MPa、温度40-60℃的条件下，通入液态CO2和夹带剂超临界萃取2-3小时，在压力5-10MPa，温度50-60℃解析得萃取物；

b上述萃取物用适量饱和石灰水溶解，离心，离心液调节ph2-5，加氯仿萃取，收集萃取液回收试剂得粗提物；

c把上述粗提物采用高速逆流色谱分离，紫外检测器检测，收集目标成分，减压干燥得蔓性千斤拔素A。

所述的夹带剂可选甲醇、乙醇、丙酮或氯仿溶液，用量为原料的1-3倍量。

所述的高速逆流色谱分离的溶剂系统可选三元溶剂体系，优选氯仿、甲醇、水，比例为3-7:2-3:2-5，下相为流动相，上相为固定相。

所述的高速逆流色谱分离的溶剂系统可选四元溶剂体系，优选正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水，比例为1-5:1-10:2-7:1-5，下相为流动相，上相为固定相。

所述的高速逆流色谱分离时主机转速可为700-1000rpm，流动相流速为1-4ml/min。

本发明的优点是：

1.方法采用超临界CO2萃取，减少了有机试剂用量，提取效率高，不造成污染，提取时间短；

2.方法还采用了高速逆流色谱分离，分离速度快、周期短，样品无损失，溶剂可以循环使用，不产生废弃物，产品纯度高。

具体实施方式

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明。

实施例1：

千斤拔药材后粉碎60目，取2kg加入超临界萃取釜中，通入液态CO2，设置在萃取压力20MPa、温度40℃，达到上述参数后，调整液态CO2流速为20kg/h，并以2L/h流速通入90%甲醇溶液，动态萃取3小时，在压力5MPa，温度50℃调件下解析，回收试剂得到萃取物100g。萃取物加200ml饱和石灰水溶解，过滤，滤液盐酸调节ph2，加等体积氯仿萃取2次，萃取液回收氯仿，得到11g粗提物。

取氯仿、甲醇、水按4:3:2混合，混合后充分分层后，取上相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机800rpm，泵入下相，待系统平衡后，流速调节为3ml/min，同时用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器检测，收集目标流分，连续制备，浓缩干燥得黄色粉末蔓性千斤拔素A1.3g，经HPLC检测，纯度98.2%。

实施例2：

千斤拔药材后粉碎80目，取2kg加入超临界萃取釜中，通入液态CO2，设置在萃取压力30MPa、温度60℃，达到上述参数后，调整液态CO2流速为23kg/h，并以2L/h流速通入95%乙醇溶液，动态萃取2小时，在压力7MPa，温度60℃调件下解析，回收试剂得到萃取物84g。萃取物加150ml饱和石灰水溶解，过滤，滤液盐酸调节ph5，加等体积氯仿萃取2次，萃取液回收氯仿，得到7.5g粗提物。