[发明专利]结核患者血清IgG抗体适配子及其制备方法有效
申请号: | 201110305110.5 | 申请日: | 2011-10-11 |
公开(公告)号: | CN103045600A | 公开(公告)日: | 2013-04-17 |
发明(设计)人: | 秦莲花;胡忠义;杨华;刘忠华;蔡江丽 | 申请(专利权)人: | 上海市肺科医院 |
主分类号: | C12N15/115 | 分类号: | C12N15/115;C12N15/10 |
代理公司: | 上海新天专利代理有限公司 31213 | 代理人: | 王敏杰 |
地址: | 200433 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 结核 患者 血清 igg 抗体 配子 及其 制备 方法 | ||
1.一种结核患者血清IgG抗体适配子,其序列为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。
2.如权利要求1所述的结核患者血清IgG抗体适配子的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤1,构建随机单链寡核苷酸文库,设计合成如下78碱基对的随机单链DNA文库:
5’-GGGAGCTCAGAATAAACGCTCAA-N35-TTCGACATGAGGCCCGG
ATC-3’,
其中N代表碱基A、G、C、T中的任意一个,容量为1014-1015;
步骤2,利用适配子技术筛选免疫球蛋白G抗体适配子。
3.如权利要求2所述的结核患者血清IgG抗体适配子的制备方法,其特征在于,步骤1中还包括对免疫球蛋白G抗体的纯化。
4.如权利要求3所述的结核患者血清IgG抗体适配子的制备方法,其特征在于,所述纯化包括按常规方法将结核患者血清过层析柱,并用硫氰酸钾洗脱。
5.如如权利要求2所述的结核患者血清IgG抗体适配子的制备方法,其特征在于,步骤2的适配子技术中使用了SELEX结合缓冲液:20mmol/L Hepes,120mmol/L NaCl,5 mmol/L KCl,1mmol/LCaCl2,1mmol/LMgCl,所述SELEX结合缓冲液的pH值为7.35。
6.如如权利要求5所述的结核患者血清IgG抗体适配子的制备方法,其特征在于,步骤2中的适配子技术使用了SELEX冲洗缓冲液:所述SELEX结合缓冲液与0.05% Tween 20溶液的混合溶液。
7.如如权利要求2所述的结核患者血清IgG抗体适配子的制备方法,其特征在于,步骤2中的适配子技术使用了SELEX洗脱缓冲液:20mmol/L Tris-HCl,4mol/L异硫氰酸胍,1mmol/L DTT,所述SELEX洗脱缓冲液pH值为8.3。
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