[发明专利]转基因动物及其制备方法

权利要求书

1.一组适于转化细胞的载体，其特征在于，包括：

第一载体，所述第一载体包含附着子序列；以及

第二载体，所述第二载体包含目的核酸序列，

其中，

所述附着子序列优选包含编码染色体骨架结合区和/或核基质附着区的核酸序列，更优选包含编码EBNA1和/或核基质附着区的核酸序列，可选地所述染色体骨架结合区是EBNA1；

任选地，所述第一载体进一步包括编码复制起始点的核酸序列，所述复制起始点优选为oriP；

任选地，所述第一载体进一步包括编码筛选标记的核酸序列，所述筛选标记优选为选自编码发光蛋白的基因、药物抗性基因的至少一种，所述发光蛋白优选为选自GFP和EGFP的至少一种，所述药物抗性基因优选为选自新霉素磷酸转移酶、和潮霉素B抗性基因的至少一种；

任选地，所述第二载体进一步包含启动子，所述启动子与所述目的核酸序列可操作地连接，所述启动子优选为真核细胞启动子，所述真核细胞启动子优选为选自CAG启动子和PGK启动子的至少一种，可选地所述真核细胞启动子为组织特异性启动子；

任选地，所述第二载体进一步包含增强子序列，所述增强子序列与所述目的核酸序列可操作地连接，所述增强子优选为CHS4增强子。

2.根据权利要求1所述的一组适于转化细胞的载体，其特征在于，所述目的核酸序列的两端分别具有适于同源重组的核酸序列，所述适于同源重组的核酸序列优选为细胞基因组中的非功能片段。

3.一种适于转化细胞的载体，其特征在于，所述载体包含附着子序列，

其中，

所述附着子序列优选包含编码染色体骨架结合区和/或核基质附着区的核酸序列，更优选包含编码EBNA1和/或核基质附着区的核酸序列，可选地所述染色体骨架结合区是EBNA1；

任选地，所述载体进一步包括编码复制起始点的核酸序列，所述复制起始点优选为oriP。

4.根据权利要求3所述的适于转化细胞的载体，其特征在于，

所述载体进一步包括编码筛选标记的核酸序列，所述筛选标记优选为选自编码发光蛋白的基因、药物抗性基因的至少一种，所述发光蛋白优选为选自GFP和EGFP的至少一种，所述药物抗性基因优选为选自新霉素磷酸转移酶、和潮霉素B抗性基因的至少一种。

5.一种制备转基因细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

使用权利要求1或2所述的一组适于转化细胞的载体转化宿主细胞，以便获得转基因细胞，优选利用所述第一载体和所述第二载体共转化所述宿主细胞，任选地通过脂质体法进行所述共转化；以及

分离转基因细胞，其中，所述转基因细胞的染色体中含有所述目的核酸序列。

6.根据权利要求5所述的制备转基因细胞的方法，其特征在于，进一步包括：

通过PCR方法验证所述转基因细胞的基因组中含有所述目的核酸序列的步骤。

7.一种转基因动物细胞或其培养物，其中所述非人转基因动物细胞或其培养物是根据权利要求5或6所述的方法获得的，优选所述动物为非人动物。

8.一种制备非人转基因动物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

提取权利要求7所述非人转基因动物细胞或其培养物的细胞核；

将所述细胞核引入所述动物的无核卵母细胞中，以便获得融合卵母细胞；

将所述融合卵母细胞在适宜的条件下进行培养，以便获得所述非人转基因动物。

9.根据权利要求8所述的制备非人转基因动物的方法，其特征在于，

所述无核卵母细胞是通过手工克隆方法去除卵子中的遗传物质而获得的。

10.一种非人转基因动物或其后代，其中所述非人转基因动物是根据权利要求8或9所述的方法获得的。