[发明专利]转基因动物重组产物精确分析检验方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及转基因哺乳动物生物安全评价及外源基因功效评定，应用本发明可精确评价转基因动物的生物学特性、转基因动物与同品种非转基因动物的生物学特性比较，以及转基因动物产品与非转基因动物产品之间的差异，从而能客观、正确、精确地对转基因动物产品作出生物安全性评价。

背景技术

根据目前的报道，对转基因哺乳动物及转基因动物产品都是用同种动物的不同个体作为对照，从而比较两者的差异或优劣，作出转基因动物或其产品的安全性评价及功效分析。由于动物之间的个体差异，这种比较和评价会出现较明显的误差，或者由于个体差异使评价和分析没有结果。

同一细胞系制备的克隆动物具有相同的染色体遗传，并且具有相同的表型。目前，通常的转基因生物安全性评价只是将转基因动物与同品种的非转基因动物比较，由于动物个体的差异，其评价结果误差较大，并且难以对核酸、蛋白质进行精确分析和比较。应用本发明技术可更加精确、可靠地评判转基因动物生物效应及其产品的生物安全性评价。

发明内容

转基因动物研究开发过程中必需对其导入 某种特性（性状）进行精确分析和检验，确定其生物学功能、对宿主动物的生理生化影响、及非转基因产品与转基因产品对人类的影响作比较分析。但是，由于动物个体差异及多态性，会给这些分析带来误差，甚至难以鉴定出结果，从而不能对转基因哺乳动物进行精确分析和测定，从而影响转基因动物生物安全性评价。

为了解决上述问题，本发明提供了一种转基因动物重组产物精确分析检验方法，该方法应用体细胞克隆技术，制备遗传背景相同的转基因和非转基因动物。其技术环节包括：细胞培养、细胞转基因、体细胞克隆（体细胞核移植，SCNT）、蛋白质和核酸分析。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种转基因动物重组产物精确分析检验方法，包括以下步骤（1）采集一个动物的体细胞（细胞类型不限：可以是成纤维细胞、上皮细胞、胚胎干细胞等），将同一个体的同类细胞分成两组，其中一组转染外源基因，另一组不转染外源基因；（2）分别用上述两组细胞制备克隆（SCNT）动物，并分别获得同一细胞系、同一细胞类型、相同年龄的转基因和非转基因克隆动物；（3）分析转基因与非转基因两组动物的表型差异，及它们的组织样品进行相关生物学试验，对转基因动物作出安全性评价。

本发明的方法应用同一细胞系分别培养转基因细胞和非转基因细胞（可以用不同细胞类型包括：成纤维细胞、上皮细胞、神经细胞或干细胞），转基因细胞与非转基因细胞来自同一个体，同样代次、相同的培养时间及培养条件。

本发明方法中应用同一雌性动物卵母细胞。

本发明方法中用同一细胞系制备的转基因细胞和非转基因细胞两种细胞分别进行体细胞克隆（SCNT），获得染色体遗传背景相同的转基因与非转基因克隆动物；对来自相同细胞系的转基因与非转基因动物进行蛋白质、核酸及生理、生化分析，比较两差异，获得精确的生物学比较信息。

本发明方法用于转基因哺乳动物新品种培育生物安全性评价；

本发明方法用于转基因哺乳动物工业生产、医药及对环境影响评价；

本发明方法用于对转基因哺乳动物外源基因的表型分析与产物质量和数量评定。

本技术应用细胞培养制备转基因（transgenic cells）与非转基因细胞系，细胞培养用DMEM培养液，加10-15胎牛血清（FCS），其中转入的外源基因是线性化的DNA，细胞转基因应用目前普遍使用的方法(电转染、脂质体转染)，DNA片段长度可0.1-300kb)。

本技术应用体细胞克隆（体细胞核移植）的方法制备相同遗传背景的转基因和非转基因动物。采用与体细胞同种的雌性哺乳动物为供质（提供诳母细胞质）动物，卵母细胞处于MⅡ期。MⅡ期卵母细胞去除细胞核，并将上述培养的转基因与非转基因细胞移入去核卵母细胞中，制备重构卵，重构卵移入代孕雌性动物，出生相同染色体遗传的转基因与非转基因动物。

附图说明

图1是转基因动物重组产物精确分析检验方法技术路线图。

图2是羊乳蛋白电泳图谱。

图3是DNA指纹图谱。

具体实施方式

在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。

下面结合具体的制备实施例和应用实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。