[发明专利]重瓣芍药幼胚培养的培养基与培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物的组织培养领域，具体涉及一种重瓣芍药幼胚培养的培养基配方，以及利用该培养基培养芍药种苗的方法。 

背景技术

我国现有的芍药优良观赏品种主要通过自然实生选种获得，有关芍药品种介绍的书籍中都未表明它们的亲本来源。虽然许多科研单位都已有目的地通过芍药亲本的选择选配开展了芍药杂交育种，但是多年来进展很慢，究其原因，这是由于芍药（Paeonia lactiflora Pall.）观赏品质中最重要的的重瓣性状是由其雌蕊或者雄蕊退化后发生瓣化变异形成，因此，利用观赏性状优良的芍药重瓣品种作父母本开展杂交育种时，很难受精结实，或虽能结实但许多种胚发育不良而不能播种出苗；根据我们的工作体验，在获得的杂交种子中，由于种子胚乳发育不充实而不能正常发芽的种子比率占70%左右，因此，提高杂交种子的成苗率是决定芍药杂交育种工作效率的关键技术。 

植物幼胚培养技术是利用现代组织培养手段将植物幼胚从种子中分离出来在离体无菌条件下发育成幼苗的技术，主要针对不能正常发育的种子进行胚拯救，这在早熟桃、杏、无籽葡萄、樱桃等作物上被成功应用。关于牡丹、芍药胚培养的工作，在程金水主编的《园林植物遗传育种学》教材第32章“牡丹芍药育种”中，李嘉钰先生指出可借鉴杂种胚培养技术提高牡丹芍药远缘杂种成苗率，但是没有引用有关文献具体说明；同样，在吕振伟的“牡丹与牡丹与芍药的育种方法”一文中也没有牡丹芍药胚培养的具体引用资料。　　　　　　　　 

关于芍药组织培养的研究已有许多工作，主要集中于利用带节间茎段、腋芽诱导丛生芽的快繁技术研究，这些研究在芍药杂交育种应用上作用不大。在周美艳(2007)的硕士学位论文“芍药组织培养及遗传转化的初步研究”中，作者开展了芍药种胚的离体培养工作，并已成苗，但是在取材方面，该研究“①、选用的品种‘粉玉奴’是单瓣品种，②、种胚为9月份的成熟种子”，这两点对于芍药育种中“①选用的品种主要为重瓣类型，②种胚发育不良，不能正常成熟”条件不一致，因此，该项研究对芍药杂交育种工作也没有直接应用价值。

发明内容

为了解决重瓣芍药由于种胚发育不良而不能正常播种出苗的技术难题，本发明提供了一种重瓣芍药幼胚培养的培养基配方，以及利用该培养基培养芍药种苗的方法，为芍药杂交育种提供关键技术支撑。 

本发明公开了一组重瓣芍药幼胚培养的培养基，它包括： 

① 诱导不定芽培养基，配方为：改良MS + TDZ 0.5～1.5 mg/L，蔗糖100g·L^-1 ,琼脂6g·L^-1，pH为5.8；

② 不定芽壮苗培养基，配方为：改良 MS + TDZ 0.01～0.05 mg/L,蔗糖30 g·L^-1，琼脂6 g·L^-1，pH为5.8；

③ 生根培养基，配方为：1/2　改良MS　+　IAA　0.5～1.0　mg/L,蔗糖30 g·L^-1，琼脂6 g·L^-1，活性炭0.1%，pH为5.8；

其中所述改良MS，是将MS培养基中的大量元素含量改良为KNO₃ 125 mg/L、NH₄NO₃ 250 mg/L、MgSO₄·7H₂O 125 mg/L、KH₂PO₄ 275 mg/L、CaCl₂·2H₂O 250 mg/L，其它微量元素、铁盐与有机成分含量不变；

改良1/2 MS是指将所述改良MS中的大量元素含量减半，其它成分不变。

本发明还公开了用上述培养基培养重瓣芍药幼胚的方法，具体步骤为： 

（1）取材：7月上旬取生长健康的未成熟重瓣芍药种子，挑取种胚。

（2）培养基配方： 

① 诱导不定芽：改良MS + TDZ 0.5～1.5 mg/L，蔗糖100g·L^-1 ,琼脂6g·L^-1，pH为5.8。置于25℃ 暗培养2个月(附图1)；

② 不定芽壮苗：将上述材料转入改良 MS + TDZ 0.01～0.05 mg/L,蔗糖30 g·L^-1，琼脂6 g·L^-1，pH为5.8。置于 25℃，1200lx光强下培养2个月(附图2)；