[发明专利]一种盐地碱蓬黄酮提取及含量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种海滨藜科植物-盐地碱蓬黄酮提取以及含量测定方法研究，属于天然产物提取及含量测定领域。 

背景技术

碱蓬，俗称嫩苗称“狼尾巴条”、常称为“海英菜”、“碱蒿”、“盐蒿”，一年生草本，茎直立，圆柱形，高达30～100厘米，花单生或2～3朵有柄簇生于叶腋的短柄上，呈团伞状，花被于果期呈五角星状，正常年份3月上中旬至6月上旬都可出苗，出土子叶鲜红。7～8月为花期，9～10月为结实期，11月初种子完全成熟。成熟时植株火红，极具观赏价值。是典型盐生植物，其栽培技术比较粗放，主要分布于东北、西北、华北和河南、山东、江苏、浙江等地。碱蓬的商品性好，碱蓬株型美观，有“翡翠珊瑚”的雅称；鲜嫩茎叶营养丰富，具有特别的海鲜味，口感好，切可入药主治食积停滞、发热等。 

黄酮类化合物是一类广泛存在于植物体内的天然产物，基本结构为C₆-C₃-C₆，在植物体内大部分与糖结合成苷，部分以游离形式存在，因具有抗病毒、抗癌、抗氧化、抗炎、抗衰老等生理和药理活性，而成为国内外研究的热点课题。研究发现，盐地碱蓬(S.salsa)叶总黄酮含量较高，并有较强的抗氧化活性。与南方碱蓬同一属的盐地碱蓬主要分布在我国各地沿海的滩涂沙地、资源丰富，其叶可食用与饲用，近年来由于沿海滩涂养殖的发展，常被视为杂草以闲置或根除。探讨该植物体内黄酮类化合物的含量及提取工艺，将为其药用开发与食品保健利用提供科学依据。 

近年来有关南方碱蓬中黄酮的提取及含量测定的研究有较多的报道，目前多采用显色法测定：以芦丁为对照品，通过与亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠显色后，采用分光光度法，在510nm处测定总黄酮含量，但在实际测定中发现显色法稳定性差，杂质干扰也会导致测定含量偏高。在紫外光波长范围内，利用高效液相色谱法测定盐地碱蓬中黄酮含量的方法研究甚少，可以有效地提高含量测定方法的准确性、灵敏度、重现性和线性范围。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种盐地碱蓬黄酮提取及含量测定方法。 

本发明所采用的技术方案： 

1)采集海滨植物盐地碱蓬，选取茎、叶，晾干、粉碎； 

2)盐地碱蓬(重量)与溶剂(体积)之比为1∶20～1∶30，浸泡30min，于微波炉中处理10min，趁热抽滤，收集提取液； 

3)提取液中加入与乙醇提取液体积比为1∶1的石油醚，萃取3～4次，脱去脂溶性 杂质，得乙醇溶液层； 

4)将乙醇溶液层转入大孔吸附树脂柱，原液与树脂量的比为1∶2，依次用水、80％乙醇洗脱至溶液由浅黄色变为无色，收集乙醇溶液洗脱液； 

5)将洗脱液于50℃条件下减压浓缩，得到盐地碱蓬黄酮类化合物浸膏。 

6)所得盐地碱蓬的黄酮提取浸膏用标准溶液溶解，配制成待测溶液； 

7)将对照品芦丁烘干至恒重，加标准溶液溶解，配制成梯度的标准溶液，在360nm波长下，记录芦丁的出峰时间并测定该标准溶液的色谱峰面积，根据峰面积与浓度之间的对应关系建立标准曲线； 

8)将待测液在360nm波长下测色谱峰面积，由标准曲线查得该待测液浓度，该浓度指即为待测液总黄酮含量，根据稀释倍数换算出盐地碱蓬黄酮含量。 

本发明利用浸泡、微波辅助提取盐地碱蓬中黄酮，本方法操作简单，时间短，溶剂的利用率高，有利于提高黄酮的制取率和降低生产成本，使所开发工艺易于实现产业化。 

本发明针对盐地碱蓬中的黄酮与对照品芦丁均在360nm±1nm波长处对紫外光的有最大吸收(见图1、2)，确定360nm作为盐地碱蓬中黄酮的测定波长，盐地碱蓬中的黄酮与对照品的出峰时间均为16.58min(见图3、4)。根据待测溶液在此波长处的吸光度值由黄酮含量对比基准即可查得该溶液的黄酮含量。该方法的绘制的标准曲线线性相关系数γ＝0.9971(见附表1、图5)，加样回收实验结果表明：回收率为99.65％，相对标准偏差为0.58％(见附表2)。因此利用本发明对盐地碱蓬中的黄酮含量进行测定，测定结果准确性高，而且方法简单，易于操作。 

本发明为盐地碱蓬中黄酮的提取和分离提供了可行性依据，为进一步研究和利用盐地碱蓬中的黄酮物质，提高盐地碱蓬的利用价值奠定了基础。 

附图说明

图1芦丁对照品光谱扫描图 

图2盐地碱蓬黄酮提取物光谱扫描图 

图3芦丁对照品高效液相色谱图 

图4盐地碱蓬黄酮提取物高效液相色谱图