[发明专利]米黑根毛霉菌株及其在制备β-葡聚糖酶和凝乳酶中的应用

权利要求书

1.米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)CAU432，其保藏编号为CGMCC No.4967。

2.用于培养权利要求1所述米黑根毛霉的培养基，由碳源、氮源、无机盐和水组成；所述碳源为如下物质中的至少一种：甘蔗皮、玉米苞皮、玉米杆、燕麦、麦麸、甘蔗渣、玉米芯、啤酒酒糟、稻壳、可溶性淀粉、几丁质、高粱杆、白酒酒糟、麸皮、稻草和葡萄糖；所述氮源为如下物质中的至少一种：酵母提取物、胰蛋白胨、大豆蛋白胨、牛肉膏蛋白胨、豆粕粉、黄豆粉、脱脂奶粉、蛋白胨、尿素、磷酸氢二铵、硫酸铵、酵母提取物和胰蛋白胨等质量混合得到的酵母蛋白胨混合物、硝酸铵和大豆蛋白胨；所述无机盐为如下物质中的至少一种：KH₂PO₄、MgSO₄和CaCl₂。

3.如权利要求2所述的培养基，其特征在于：所述培养基由所述碳源、所述氮源、KH₂PO₄、MgSO₄、CaCl₂和水组成；

所述培养基优选为如下(a)至(d)中任一所述的培养基：

(a)将所述碳源10g-50g、氮源10g、KH₂PO₄ 5g、MgSO₄·7H₂O 0.3g和CaCl₂ 0.3g溶于水并用水定容至1L得到的培养基；

(b)将所述碳源和基础培养液甲混合得到的培养基；所述基础培养液甲的制备方法为：将所述氮源10g、KH₂PO₄ 5g、MgSO₄·7H₂O 0.3g和CaCl₂ 0.3g溶于水并用水定容至1L得到的培养基；所述培养基的初始含水量为70-90％；

(c)将所述碳源、所述氮源和基础培养液乙混合得到的培养基；所述基础培养液乙的制备方法为：将CaCl₂ 0.3g、KH₂PO₄ 5g、MgSO₄·7H₂O 0.3g和吐温-80 0.34g溶于水并用水定容至1L；所述培养基的初始含水量为30-75％；所述碳源和所述氮源的质量比为5∶1；

(d)将所述碳源10g-50g、所述氮源10g、KH₂PO₄ 5g、MgSO₄·7H₂O 0.3g和CaCl₂0.3g溶于水并用水定容至2.5L得到的培养基。

4.一种制备β-葡聚糖酶和/或凝乳酶的方法，是采用权利要求2或3所述培养基发酵权利要求1所述米黑根毛霉，得到β-葡聚糖酶和/或凝乳酶。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法为如下(1)至(5)中的任意一种：

(1)采用权利要求3的(a)所述培养基50℃振荡发酵权利要求1所述米黑根毛霉，得到β-葡聚糖酶；所述发酵的时间为1天以上，优选为1-6天，最优选为3-5天；

(2)采用权利要求3的(b)所述培养基50℃静置发酵权利要求1所述米黑根毛霉，得到β-葡聚糖酶；所述发酵的时间为1天以上，优选为1-6天，最优选为3-5天；

(3)采用权利要求3的(c)所述培养基37℃静置发酵权利要求1所述米黑根毛霉，得到凝乳酶；所述发酵的时间为1天以上，优选为1-6天，最优选为2天；

(4)采用权利要求3的(a)所述培养基37℃振荡发酵所述米黑根毛霉CAU432，得到凝乳酶；所述发酵的时间为1天以上，优选为1-6天，最优选为3-5天；

(5)在发酵罐中采用权利要求2的(d)所述培养基发酵权利要求1所述米黑根毛霉，得到β-葡聚糖酶；所述发酵的条件为：40-55℃、通气量为1-2vvm、搅拌速率为300-600rpm、发酵时间为10h以上。