[发明专利]从香菇中提取具有抗氧化降血糖作用的活性蛋白的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从香菇中提取活性蛋白的方法，属于天然活性成分提取技术领域。

背景技术

香菇是一种生长在木材上的真菌，由于其营养丰富，素有“植物皇后”美誉。香菇性味甘、平、凉；入肝、胃经。有补肝肾、健脾胃、益气血、益智安神、美容颜之功效。还可化痰理气，益胃和中，解毒，抗肿瘤，托痘疹。主治食欲不振、身体虚弱、小便失禁、大便秘结、形体肥胖、肿瘤疮疡等病症。

据报道，鲜香菇除含水外，固形物中含粗蛋白，粗脂肪，粗纤维、灰分等。香菇中的化学成分主要有香菇多糖、香菇嘌呤、核酸、氨基酸、多种微量矿质元素和酶类物质、维生素等。可见，香菇蛋白在香菇中占有十分重要的地位。

相对于研究相对深入的香菇多糖，香菇蛋白的研究尚处初级阶段，已有的实验结果表明香菇蛋白对体外培养的癌细胞u14有直接的细胞毒作用，明显抑制肿瘤细胞的生长，而且在体外能直接杀伤肿瘤细胞，并可诱导肿瘤细胞凋亡。另外，香菇蛋白能明显延长荷瘤小鼠的生存期并对实体肿瘤有明显抑制作用，还能激活机体的免疫系统，提高巨噬细胞、细胞因子的作用效果，来实现其抗肿瘤作用。更多的实验表明，香菇蛋白能有效抑制苹果输纹褐腐病菌、灰霉病菌和落花生褐斑病菌的菌丝的生长，同时能够抑制HIV-1逆转录酶的活性和白血病细胞的增殖。

目前通常采用碱法直接提取的方法进行香菇蛋白的分离提取，但蛋白的得率活性均不十分理想，而且大量工业酒精的应用成为了香菇蛋白在食品领域应用的障碍。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种从香菇中提取具有抗氧化降血糖作用的活性蛋白的方法。

从香菇中提取具有抗氧化降血糖作用的活性蛋白的方法，其特征是包括如下步骤：

(1)粉碎香菇；

(2)水提取香菇蛋白：将经粉碎的1质量份的香菇粉末加入到10质量份～20质量份的去离子水中，在1℃～10℃提取1小时～3小时，减压过滤，得到香菇水溶性蛋白提取液；并干燥滤渣；

(3)盐溶液提取香菇蛋白：将步骤(2)获得的滤渣加入到0.1M～0.2M的NaCl水溶液中，所述香菇与所述NaCl水溶液的比例为1g∶10ml～20ml，在1℃～10℃提取1小时～3小时，减压过滤，得到香菇盐溶性蛋白提取液；并干燥滤渣；

(4)碱溶液提取香菇蛋白：将步骤(3)获得的滤渣加入到0.05M～0.15M Na0H水溶液中，所述香菇与所述NaOH水溶液的比例为1g∶10ml～20ml，在1℃～10℃提取1小时～3小时，减压过滤，得到香菇碱溶性蛋白提取液；并干燥滤渣；

(5)醇溶液提取香菇蛋白：将步骤(4)获得的滤渣加入到体积浓度为70％～80％的乙醇水溶液中，所述香菇与所述乙醇水溶液的比例为1g∶10ml～20ml，在1℃～10℃提取1小时～3小时，减压过滤，得到香菇醇溶性蛋白提取液；

(6)真空浓缩：在40℃～60℃和0.06MPa～0.1MPa的压力下将步骤(2)～(5)分别得到的蛋白提取液分别置于旋转蒸发仪中减压浓缩至原体积的1/10～1/5；

(7)盐析：向步骤(6)所获得的各个蛋白提取液的浓缩液中，加入硫酸铵，使硫酸铵在所述各个浓缩液中的质量分数为45％～55％，1℃～10℃静置18小时～24小时，在3000转/分～4000转/分的转速下离心分离15分钟～30分钟，分别收集各沉淀物；

(8)透析：将步骤(7)获得的各沉淀物分别加水使其完全溶解，分别加入到透析袋中，在蒸馏水中透析24小时～48小时，在透析期间换蒸馏水3次～5次；

(9)冷冻干燥：将透析后的溶液分别冷冻干燥，分别得到香菇水溶性蛋白、香菇盐溶性蛋白、香菇碱溶性蛋白和香菇醇溶性蛋白。

本发明的与现有提取方法的最大区别在于本发明先用粉碎机对香菇进行粉碎，以使提取过程更加充分；然后通过使用不同极性的溶剂对香菇中的蛋白进行提取，并利用盐析的方法对其中的蛋白进行分离。与已有的直接使用碱法进行提取，样品的蛋白含量有了明显增加，而且由于不同溶剂的分级作用，使活性较高的蛋白得到富集，表现出的抗氧化和降血糖活性明显增强。另外，本法所采取的第一步水提后得到的溶液可以继续利用分离得到香菇多糖，而得到的其他样品中蛋白含量也相对较高，可以留作他用。

本发明的制备过程简便，无毒，安全，收率高。

附图说明

图1为本发明的方法获得的香菇水溶性蛋白、香菇碱溶性蛋白和已有技术(碱法直接提取)的蛋白产品的DPPH自由基清除能力。