[发明专利]一种日落黄色素半抗原与人工抗原的合成方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及偶氮类色素衍生物，尤其涉及一种日落黄色素半抗原及其人工抗原的制备方法，属于有机合成领域。

【背景技术】

食用色素作为常用的食品添加剂，由于可使食物本身的颜色变的鲜艳，受到广大消费者的青睐，也成为食品行业大力使用的添加剂。食用色素使用较多的是食用合成色素，且大多为偶氮类色素。我国对在食品中添加合成色素也有严格的限制：凡是肉类及其加工品、鱼类及其加工品、醋、酱油、腐乳等调味品、水果及其制品、乳类及乳制品、婴儿食品、饼干、糕点都不能使用人工合成色素。只有汽水、冷饮食品、糖果、配制酒和果汁露可以少量使用，一般不得超过1/10000。一般情况下，偶氮类色素本身不会对人体产生有害影响，但是在体内还原分解，可形成芳香胺化合物，芳香胺在体内经过代谢活动后与靶细胞作用可能使DNA发生变化，成为人体病变的诱发因素，对人体或动物有潜在的致癌性和致突变性。由于其致癌性和致突变性，世界上很多国家都对偶氮类染料的使用实施了严格的规定。瑞典、芬兰、挪威、印度、丹麦、法国等早已禁止使用偶氮类色素，其中挪威等一些国家还完全禁止使用任何化学合成色素。

日落黄，英文名称：Sunset Yellow，是由对氨基苯磺酸重氮化，与2-萘酚-6-磺酸偶合，经精制而得。虽是我国批准使用的食品添加剂，但在我国存在严重地超限量和超范围使用，对人民群众的身体健康造成严重威胁，加重了我国的食品安全问题。因此，加强日落黄以及类似色素检测方法的研究具有重要意义。

目前日落黄的检测方法仅限于高压液相法、质谱法等仪器方法，虽准确、稳定、可靠，可作为标准方法，但价格昂贵，费时较长，需要大型仪器设备，并且需要专门的技术人员，所以难于用于现场操作。而酶联免疫检测法(ELISA)具有灵敏、快速、简便、特异性好、样品需求量少、对昂贵仪器以及专业操作人员的依赖程度较低等优点，非常适于现场监控和样品的批量检测。但国内外尚未有针对日落黄的残留免疫检测方法的报道。为弥补这一空白，有必要设计和制备出日落黄相应的半抗原以及与载体蛋白相连的人工抗原，在此基础上建立相关的酶联免疫检测方法。

【发明内容】

本发明的目的在于提供一种偶氮类色素日落黄半抗原及人工抗原的合成方法。

本发明所涉及的日落黄，其结构式为：

日落黄

本发明的技术方案如下：

(1)将日落黄与二氯亚砜以1∶6-1∶7的摩尔比溶在甲苯中，加热回流反应2h后停止。旋蒸除去剩余的二氯亚砜与甲苯，得到双磺酰氯(化合物I)。

(2)将双磺酰氯I与氨基酸甲酯(甘氨酸甲酯、丙氨酸甲酯、缬氨酸甲酯、亮氨酸甲酯、异亮氨酸甲酯、苯丙氨酸甲酯、蛋氨酸甲酯)以1∶3的摩尔比溶于丙酮中，在6倍量碱(三乙胺、吡啶、氢氧化钠、碳酸钾)的作用下室温反应，蒸除丙酮，柱色谱分离，得到日落黄衍生物IIA。

(3)将日落黄衍生物II溶于甲醇NaOH溶液中，30℃下反应0.5h。调节PH为酸性，抽滤，烘干，得到日落黄衍生物IIIA。

(4)所用氨基酸甲酯为对氨基苯甲酸甲酯时，重复步骤2和3，得到日落黄衍生物IIIB。

(5)所用氨基酸甲酯为3-氨基丙酸甲酯、4-氨基丁酸甲酯、5-氨基戊酸甲酯、6-氨基己酸甲酯时，重复步骤2和3，得到日落黄衍生物IIIC。

(6)将NHS和DCC以1∶1的摩尔比溶于二氯甲烷中，再将日落黄衍生物III加入到NHS和DCC的混合溶液中，4℃反应24h，旋蒸除去二氯甲烷，得到活化酯。

(7)将日落黄活化酯和牛血清蛋白BSA以15∶1-30∶1的摩尔比溶于磷酸生理盐水(PBS)缓冲液中，4℃下搅拌反应6-7h。透析，高速离心，冻干上清液，得到日落黄免疫抗原。

通过本研究，我们可以成功地合成日落黄半抗原，为制备此类色素的相关抗体以及快速检测奠定了基础。

【附图说明】

图1是本发明化合物IIIA的合成路线。

图2是IIIB结构图。

图3是IIIC结构图。

【具体实施方式】

下面结合实施例进一步描述本发明，但不以任何方式限制本发明的范围。

实施例1

100ml的圆底烧瓶中加入2.0g(4.4mmol)日落黄，25ml无水甲苯，电磁搅拌下缓慢加入2.0ml(28.1mmol)二氯亚砜，再滴入几滴无水DMF，回流2h后停止反应。旋蒸除去剩余的二氯亚砜与甲苯，加入石油醚，抽滤，烘干，得深红色固体化合物I。

实施例2