[发明专利]一种用金磁微粒纯化植物组织基因组DNA的方法

权利要求书

1.一种用金磁微粒纯化植物组织基因组DNA的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1)制备含有基因组DNA的样品裂解液

取植物组织样本，依次加入100～800μl的两种裂解液，其中第一种裂解液中含有质量体积比为2％～5％聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、2％～5％十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和体积分数为0.5％～2％β-巯基乙醇，第二种裂解液中含有3～6M盐酸胍、体积分数为2％～5％Triton X-100；混匀后于水浴中充分裂解5～30min，再加入10～50μl的10mg/ml RNase溶液，得到含有基因组DNA的样品裂解液；

2)用氯仿抽提后离心

用0.6ml～1.2ml氯仿在所述样品裂解液中进行样本抽提，然后8000rpm～13000rpm离心5min，得到含有基因组DNA的上清；

3)结合

取400～1000μg金磁微粒与含有基因组DNA的上清混合，在结合缓冲液的作用下，形成含有金磁微粒-基因组DNA复合物的溶液；

4)清洗

对含有金磁微粒-基因组DNA复合物的溶液进行磁性分离，弃去上清液，再加入清洗液混匀，磁性分离，弃上清，得到金磁微粒-基因组DNA复合物；

5)洗脱

将洗脱液与金磁微粒-基因组DNA复合物混匀，使基因组DNA从金磁微粒上转到洗脱液中，磁性分离直至上清澄清，收集上清液，所得上清液即为纯化得到的基因组DNA溶液。

2.根据权利要求1所述的用金磁微粒纯化植物组织基因组DNA的方法，其特征在于：步骤1)中所述第一种裂解液中含有质量体积浓度为2％～5％聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、2％～5％十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和体积分数为0.5％～2％β-巯基乙醇，第二种裂解液中含有3～6M盐酸胍、体积分数为2％～5％Triton X-100以及0.005～0.01M乙二胺四乙酸(EDTA)、0.5～2M NaCl和0.05～0.2M Tris-HCl。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤3)中的结合缓冲液是聚乙二醇与氯化钠的混合溶液，其中氯化钠的终浓度为1M～3M，聚乙二醇(PEG)的分子量在6000～10000之间，浓度为10％～30％。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤5)中所述洗脱液是含有10mM Tris-HCl和1mM EDTA、pH＝8.0的TE溶液或无核酶水。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤2)采用氯仿只进行一次样本抽提。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤4)中所述清洗液是50％～85％的乙醇。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤1)中所述水浴的温度为50～65℃。