[发明专利]一种利用固定化拟无枝酸菌分段发酵无锡他汀的方法

权利要求书

1.一种利用固定化拟无枝酸菌分段发酵无锡他汀的方法，其特征在于将拟无枝酸菌细胞进行固定化处理后，采用pH以及发酵时间两阶段发酵控制生产无锡他汀。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述拟无枝酸菌固定化方法为：

将培养好的种子菌悬液与海藻酸钠溶液按照1∶5的比例充分混匀，然后用注射器将其滴入CaCl₂溶液中，固定1h，滤出小珠，用蒸馏水洗净，得到固定化细胞。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述拟无枝酸菌固定化方法为：将培养好的种子菌悬液与20g/L海藻酸钠溶液按照1mL菌悬液/5mL凝胶的比例充分混匀，然后用注射器将其滴入10g/L的CaCl₂溶液中，注射高度为10cm，固定1h，滤出小珠，用蒸馏水洗净，得到粒径为3mm左右的固定化细胞。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于所述两阶段发酵控制条件为：发酵第一阶段，固定化细胞经过增殖培养后，按1.0-3.0g/L的浓度加入洛伐他汀溶液，30℃发酵48h生成产物I，发酵pH为7.5；发酵第二阶段，将第一阶段发酵结束的固定化细胞洗净，加入新鲜转化培养基，按照0.1-0.3g/L的的浓度加入产物I溶液，30℃发酵10h生成无锡他汀，发酵pH为5.5。

5.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于所述拟无枝酸菌可用于多次发酵，用无菌去离子水将上一批发酵结束的固定化细胞冲洗三次，加入新鲜转化培养基，进行下一批发酵。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述拟无枝酸菌最适发酵批次为5批。

7.根据权利要求1-3所述的方法，其特征在于所述拟无枝酸菌为孢子种子液。