[发明专利]快速检测基因组中基因拷贝数的方法无效
申请号: | 201110317115.X | 申请日: | 2011-10-19 |
公开(公告)号: | CN102337340A | 公开(公告)日: | 2012-02-01 |
发明(设计)人: | 计皖;李健;柳金凤 | 申请(专利权)人: | 宁夏林业研究所股份有限公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;G01N21/64 |
代理公司: | 宁夏专利服务中心 64100 | 代理人: | 叶学军 |
地址: | 750004 宁夏回族*** | 国省代码: | 宁夏;64 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 快速 检测 基因组 基因 拷贝 方法 | ||
1.快速检测基因组中基因拷贝数的方法,包括以下操作步骤:1)选取生物体中一个已知拷贝数的基因为内参照基因,分别设计目标基因和内参照基因的TaqMan PCR引物和探针;2)用PCR反应将目标基因和内参照基因分别扩增和纯化,测试各自的重量浓度,并根据其核酸片段长短,将重量浓度换算为摩尔浓度;3)将目标基因和内参照基因按不同摩尔浓度比混合成系列标准品,用实时PCR仪分别测定目标和内参照基因标准品的阈值荧光循环数,并将系列阈值荧光循环数差值与相应摩尔浓度比的对数做成标准曲线;4)提取并纯化所测生物体DNA,用实时PCR仪分别测定目标和内参照基因的阈值荧光循环数,算出其差值,然后按照标准曲线将其换算为目标基因和内参照基因摩尔浓度比,亦即基因拷贝数比。
2.根据权利要求1所述方法,其特征在于:所述目标基因和内参照基因的标准摩尔浓度溶液是由PCR扩增并纯化制成的。
3.根据权利要求1或2所述方法,其特征在于:所述不同摩尔浓度比的目标基因/内参照基因标准混合液,是由权利要求2的目标基因和内参照基因的标准摩尔浓度溶液按比例相混制成的。
4.根据权利要求1-3任一所述方法,其特征在于:目标基因/内参照基因的标准曲线,是由目标基因和内参照基因阈值荧光循环数的差值与目标基因和内参照基因摩尔浓度比的对数值对应形成的。
5.根据权利要求1-4任一所述方法,其特征在于:提取并纯化生物体的DNA,用实时PCR测定其目标基因和内参照基因的阈值荧光循环数,并根据权利要求4的标准曲线来确定目标基因和内参照基因的基因拷贝数比值。
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