[发明专利]基于SSR-PCR的油菜杂交种种子纯度检测方法

权利要求书

1.一种基于SSR-PCR的油菜杂交种种子纯度鉴定方法，包括以下步骤：

(1)DNA提取：取数量为N的待测油菜杂交种样品种子进行发芽培养，将培养后的幼苗进行碱裂解，同时进行超声波破碎处理，再加入提取缓冲液，混匀后得到所述杂交种样品种子的基因组DNA溶液；

(2)PCR扩增：利用SSR引物序列对步骤(1)中所述杂交种样品种子的基因组DNA进行PCR扩增；

(3)电泳分离：将步骤(2)中PCR扩增产物在琼脂糖凝胶中进行稳压电泳分离；

(4)显带读数：将步骤(3)中电泳分离后的凝胶置于凝胶成像系统中成像、读带，将所述杂交种样品种子的谱带特征与其父母本种子的谱带特征进行比对，统计出所述杂交种样品种子中具有父本谱带特征和母本谱带特征的种子数量n，再根据公式“品种纯度(％)＝(1-n/N)×100％”即可得到待测油菜杂交种样品的纯度。

2.根据权利要求1所述的基于SSR-PCR的油菜杂交种种子纯度检测方法，其特征在于：所述超声波破碎处理是在加满水的超声波洗涤器中进行，超声波破碎处理时的水温控制在65℃～80℃，超声波破碎的功率控制在200W～250W，超声波破碎处理的时间为5min～20min。

3.根据权利要求1或2所述的基于SSR-PCR的油菜杂交种种子纯度检测方法，其特征在于，所述SSR引物序列包括以下八种引物对中的任意一种：

引物对1：正向引物序列(5′→3′)：AAGAACGTCAAGATCCTCTGC；

         反向引物序列(5′→3′)：ACCACCACGGTAGTAGAGCG；

引物对2：正向引物序列(5′→3′)：AGCCTTGTTGCTTTTCAACG；

         反向引物序列(5′→3′)：AGTGAATCGATGATCTCGCC；

引物对3：正向引物序列(5′→3′)：AAAGGACAAAGAGGAAGGGC；

         反向引物序列(5′→3′)：TTGAAATCAAATGAGAGTGACG；

引物对4：正向引物序列(5′→3′)：GCGTTCTAGGGTTTGTGGGA；

         反向引物序列(5′→3′)：GAGGAAGTGAGAGCGGGAAATCA；

引物对5：正向引物序列(5′→3′)：CCAGGTTACTGTTAAAGAATAAGAGAG；

         反向引物序列(5′→3′)：ATCGTCTGCGAGTCTCCTTG；

引物对6：正向引物序列(5′→3′)：AAGCTGTTCGATGAAATGCC；

         反向引物序列(5′→3′)：ACTTGTTTGCATCCATTGCC；

引物对7：正向引物序列(5′→3′)：TCGGGGTTTGTTGTGAGG；

         反向引物序列(5′→3′)：GAGGAGGATGCTAAGAGTGAGC；

引物对8：正向引物序列(5′→3′)：CGGTCAGATTCCAACAGA；

反向引物序列(5′→3′)：GCCATCTCAGAGACGACA。

4.根据权利要求3所述的基于SSR-PCR的油菜杂交种种子纯度检测方法，其特征在于，利用所述引物对1对品种名称为丰油701、丰油730、湘杂油2号或湘杂油4号的油菜杂交种种子样品的纯度进行鉴定；利用所述引物对2对品种名称为丰油701或沣油737的油菜杂交种种子样品的纯度进行鉴定；利用所述引物对3对品种名称为沣油737、沣油520、丰油730、沣油5103或沣油827的油菜杂交种种子样品的纯度进行鉴定；利用所述引物对4对品种名称为丰油730或沣油5103的油菜杂交种种子样品的纯度进行鉴定；利用所述引物对5对品种名称为沣油682或沣油823的油菜杂交种种子样品的纯度进行鉴定；利用所述引物对6对品种名称为沣油792的油菜杂交种种子样品的纯度进行鉴定；利用所述引物对7对品种名称为沣油682或沣油823的油菜杂交种种子样品的纯度进行鉴定；利用所述引物对8对品种名称为沣油737、沣油792或湘杂油4号的油菜杂交种种子样品的纯度进行鉴定。