[发明专利]一种治疗肿瘤的蛋白质

说明书

技术领域

本发明涉及一种蛋白质，具体涉及一种用于治疗肿瘤的蛋白质。

背景技术

肿瘤是威胁人类健康的最主要原因之一。肿瘤的发病率和死亡率均是每年在世界范围造成死亡人数较高的疾病，至今尚没有特效的治疗方法。目前有多种治疗肿瘤的方法，而手术、放疗和化疗是最常用的方法。然而，手术后的肿瘤常常复发；而放疗和化疗不仅杀伤肿瘤细胞，也同时杀伤机体的正常细胞，副作用甚大。寻找低性和高疗效的抗癌药物一直是一项艰巨的任务。固体肿瘤的发展需要血管而为肿瘤提供营养。如果抑制肿瘤的血管新生，那么将能饿死肿瘤。血管生成抑制因子是一类抑制血管生成的蛋白质，血管生成抑制因子抗癌的临床试验结果表明，血管生成抑制因子对人体无毒性或毒性轻微。研究血管生成抑制因子抗癌是当前抗癌研究的热点。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗肿瘤的蛋白质，这种蛋白质具有抑制血管新生的功能，具有血管生成抑制因子的特性。是通过DNA序列合成方法合成一段DNA序列，将这段DNA序列重组于毕赤酵母中表达，并将表达产物进行纯化，表达产物活性分析证明，所合成基因编码的蛋白具有抑制血管新生和抑制肿瘤发展的生物学活性。其核苷酸序列和它的氨基酸序列如序列表中所述。

本发明的目的通过以下技术措施实现：

1.DNA序列的合成

设计如下DNA序列，并用套叠PCR方法进行其序列合成。将其序列命名为scl。

ATGCACGGAGACTCAGAATACAACATCATGTTTGGTCCCGACATCTGTGGCCCTGGCACCAAGAAGGTTCATGTCATCTTCAACTACAAGGGCAAGAACGTGCTGATCAACAAGGACATCCGTTGCAAGGATGATGAGTTTACACACCTTACACTGATTGTGCGGCCAGACAACCATCATCATCATCATCATTAG

2.DNA序列编码蛋白功能的证明

(1)DNA序列重组于酵母中表达

通过DNA内切酶和T4DNA连接酶的作用，将以上合成的DNA片段插入毕赤酵母表达载体pPIC9K的多克隆位点，将其表达载体命名为pPIC9K-scl(附图1)。用电转法将pPIC9K-scl转化毕赤酵母GS115，获得工程菌GS115(pPIC9K-scl)。用BMGY-BMMY发酵GS115(pPICP9K-scl)诱导表达Scl蛋白。

(2)表达产物活性分析

发酵液上清过Ni-Agarose His标签蛋白纯化柱进行纯化(附图2)，收获的含目标蛋白的液体经过抽滤除盐后，进行抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管生成试验和治疗实验小鼠黑色素瘤模型试验。结果是Scl蛋白抑制鸡胚绒毛尿囊新生血管生成，其对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的抑制作用强于Angiostatin(附图3)，显著地抑制实验小鼠肿瘤在机体内的发展(附图4)，具有治疗肿瘤的作用。利用上述蛋白质制备药物，可用于治疗肿瘤，是一种治疗肿瘤的药物。

本发明的优点：

本发明人工合成scl基因，将scl基因重组于毕赤酵母基因组进行表达获得的Scl蛋白，将表达产物纯化后获得的Scl蛋白能有效地抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管新生，具有治疗肿瘤的功能。血管生成抑制因子在通过抑制肿瘤的血管新生而治疗肿瘤中有着重要的用途。虽然已发现的血管生成抑制因子有多种，但是本发明的血管生成抑制因子基因序列小，分子量小的药物有利于在机体内的传输，并且Scl蛋白抑制血管生成的作用较强。为生产特效的治疗肿瘤的药物的研究和开发应用创造了必要的条件，具有重要的理论和实践意义。

附图说明

附图1.构建含scl基因的毕赤酵母表达载体

附图2.纯化重组Scl蛋白

M.蛋白Marker；1.纯化的重组Scl蛋白。

附图3.Scl蛋白抑制鸡胚绒毛尿囊膜新血管生成试验

A.PBS；B.Scl蛋白(20μg)；C.Angiostatin蛋白(20μg)

附图4.Scl蛋白治疗试验小鼠肿瘤

a.PBS；b.Scl蛋白

具体实施方式

1.DNA序列的合成

(1)设计如下DNA序列。