[发明专利]一种特异识别血小板αIIbβ3的抗栓药物RWR

说明书

技术领域：

本发明涉及蛋白质多肽领域，具体地讲，涉及一种能够特异识别血小板表面整合素α_IIbβ₃的多肽及其制备和应用。 

背景技术：

心脑血管疾病如心肌梗死、脑梗塞是一种严重威胁人类健康的重大疾病，全世界每年死于心脑血管疾病的人数高达1500万人，居各种死因首位。心脑血管疾病具有发病率高、致残率高、死亡率高、复发率高，并发症多即“四高一多”的特点，已成为人类死亡病因最高的头号杀手。即使应用目前最先进、完善的治疗手段，仍有50％以上心脑血管疾病幸存者生活不能自理。 

众多心脑血管疾病的发生、发展都和病理性血栓形成有关。迄今已用于临床的血栓抑制剂有很多种。传统的溶栓抗栓药物虽具有一定的抑制血栓生成作用，但其局限性不容忽视。例如溶栓药尿激酶、链激酶，TPA等在不同程度上存在着特异性差，需用量大，有出血倾向以及使用后再次栓塞等缺点，抗栓药阿斯匹林对高切应力所致的血小板活化无抑制作用，而且当冠脉狭窄程度增加时抗栓效果减弱。而且现有绝大多数的抗血小板聚集药，只能阻止血小板活化途径中的一条通路，当某一特定通路被充分抑制时，血小板仍可通过其它途径活化，引起血小板聚集。基于传统血栓生成抑制剂的局限性，科学家们仍在 继续研究新的血栓抑制剂，不断探索疗效确切、成本低廉的抗血栓药。 

血栓形成的共同通路也即关键环节是：纤维蛋白α链的RGD(Arg-Gly-Asp)模体特异识别血小板表面α_IIbβ₃受体，介导纤维蛋白与血小板的结合，该过程犹如链条，把相邻的血小板连在一起，形成血栓。由于RGD模体具有与α_IIbβ₃受体特异结合的特性，因此含有RGD序列的多肽即可以竞争性抑制纤维蛋白与血小板的结合，从而抑制血栓形成，即可以阻断血栓形成的最后通路。 

RGD是精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸组成的三肽。1984年Pierschbacher和Ruoslahti首次确定了RGD序列为人纤维连接蛋白与其受体结合位点。研究发现：RGD广泛存在于细胞识别系统。基质蛋白中的RGD是与细胞表面特异受体相互作用的识别位点，这些细胞表面膜蛋白是广泛分布的超级家族-粘附受体的成员，称为整合素。整合素在正常情况下无活性，一旦在激素，细胞因子或其它因素的刺激下，其构型和亲合力发生改变，整合素受体与特异性配体的RGD结构结合，引起细胞内一系列生化改变，进而影响多种组织细胞功能的调控，包括细胞凋亡，分化，增殖，迁移，粘附，血小板聚集等一系列病理生理过程。 

国内外对RGD多肽的生物学活性进行的大量研究，证明了RGD多肽在疾病治疗方面具有广阔的应用前景。RGD及类似物对预防和治疗心脑血管疾病、骨质疏松以及由细胞粘连异常而导致的肿瘤等疾病具有重要作用，人工合成的RGD多肽或化合物也具有类似的生物学活性，含有RGD多肽已成为医学研究的热点。1991年J.Samanen 等合成了一系列含有RGD序列的小肽，经过药理活性试验发现了它们可抑制纤维蛋白原与血小板的结合，抑制血栓的形成。众多实验研究表明，RGD多肽作为α_IIbβ₃受体拮抗剂，可以阻断血栓形成的最终通路，理论上具有彻底抑制血栓形成的功能。 

目前一些科学家通过人工合成一些RGD序列的小肽进行基础及临床试验，已取得一定的成果。如RGDS，DRGDW，GRGDSPA等都可抑制纤维蛋白与血小板结合，抑制血栓形成。新近的实验研究表明，用氨基酸替代法研究RGD与血小板α_IIbβ₃结构和活性的关系时发现，用Val取代Arg将使RGD的活性降低10倍，用Ala取代Gly出现类似结果，用Glu取代Asp将使其功能完全丧失。逆转RGDS和RGDV序列将使其对血小板抑制功能完全丧失。另有实验研究表明，GRGDSP六肽(Gvy-Ay-Gy-Asy-Ser-Pro)可直接抑制纤维蛋白(Fg)与血小板的结合；Eward等发现RGDS明显抑制Fg和ADP激活的血小板结合；Rote等发现含RGD序列的SC-4992呈量依赖抑制血栓形成，抑制ADP和花生四烯酸引起的血小板聚集。其中RGD序列是高度保守的，是识别受体必需的。天然存在的含RGD的多肽和人工合成含RGD的小肽，一般都具有相似的功能，既可以抑制血栓形成、也具有抑制肿瘤转移和骨质疏松的功能。因此，RGD类似物作用广泛但不特异，如何提高其作用的特异性及活性，是研究人员的关注热点，也是本课题组多年来的研究重点。