[发明专利]抑制FLPs神经肽基因的dsRNA及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种抑制FLPs神经肽基因的dsRNA及其应用。

背景技术

根结线虫是世界范围内的重要病原生物之一，它给世界农业生产带来了严重损失，每年全世界因此而造成的农业经济损失高达1570亿。目前世界上已经报道的根结线虫有90余种，而南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、爪哇根结线虫(M.javanica)，花生根结线虫(M.arenaria)和北方根结线虫(M.hapla)占整个根结线虫的95％。南方根结线虫造成设施生产的一系列问题并使其大量经济作物减产。而在我国北方，以南方根结线虫为主，根结线虫的寄主植物范围广泛，超过3000种植物，包括单子叶植物，双子叶植物，草本植物，木本植物，特别是蔬菜中的茄科、葫芦科等经济价值高的作物，尤其是番茄和黄瓜，受害后，一般可造成减产30％～40％，甚至绝收。当前，根结线虫的防治主要以化学药品防治为主，但是，由于其对环境、人畜安全的危害，逐渐被立法部门取消。所以，安全有效的生物学防治方法迫在眉睫。

根结线虫主要包括六个生育期，而在线虫的二龄期，利用发达的受神经支配的头感器，通过头部的嗅觉神经元(AWA，AWC)来感知根系散发出的信号物质，向寄主植物进行趋向性迁移，侵染植物，从而完成其生命周期。因此，在根结线虫的二龄期，可以通过干扰根结线虫的趋向性迁移，起到线虫防治的目的。随着模式动物Caenorhabditis elegans基因组测序工作的完成，已经分离和鉴定了19,800个能够编码6627个蛋白家族的基因，并对有关基因的功能进行了详细而深入的研究。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种dsRNA。

本发明提供的dsRNA，由序列表中序列1所示的核苷酸和序列表中序列2所示的核苷酸组成的双链RNA。

上述dsRNA的编码基因也是本发明保护的范围。

含有上述dsRNA或其编码基因的重组表达载体、转基因细胞系、重组菌或表达盒也是本发明保护的范围。

本发明的另一个目的是提供一种DNA分子。

本发明提供的DNA分子，其核苷酸序列为序列表中的序列3。

本发明的另一个目的是提供一种防治线虫的产品。

本发明提供的产品，其活性成分为所述dsRNA或所述编码基因或所述重组表达载体、转基因细胞系、重组菌或表达盒或所述DNA分子。

上述dsRNA或其编码基因或上述重组表达载体、转基因细胞系、重组菌或表达盒或上述的DNA分子在抑制Mi-flp-18基因表达中的应用也是本发明保护的范围，所述Mi-flp-18基因的核苷酸序列为序列表中的序列4。

上述dsRNA或上述编码基因或上述重组表达载体、转基因细胞系、重组菌或表达盒或上述的DNA分子在制备防治线虫产品中的应用也是本发明保护的范围；

或上述dsRNA或上述编码基因或上述重组表达载体、转基因细胞系、重组菌或表达盒或上述的DNA分子在防治线虫中的应用也是本发明保护的范围。

上述应用是通过降低线虫对寄主植物的趋向性迁移和/或降低线虫侵染和繁殖能力体现。

在上述应用中，所述降低线虫对寄主植物的趋向性迁移通过降低吸引指数体现；

在上述应用中，所述降低线虫侵染和繁殖能力通过减少根结数量体现；

在上述应用中，所述线虫为南方根结线虫；

在本发明的实施例中，上述寄主植物为番茄。

本发明的实验证明，本发明提供了一种dsRNA，浸泡南方根结线虫的二龄幼虫，通过RNAi后，有效的趋避南方根际线虫向寄主植物的趋向性迁移，降低对寄主植物的侵染，而且还抑制了线虫的繁殖，从生物学安全的角度上考虑，dsRNA不会产生功能蛋白，具有专一性的特点，减少对非目标生物的影响。

附图说明

图1为RNAi处理对线虫表型、吸收及在转录水平的效应

图2为RNAi处理对线虫趋向性的影响

图3为RNAi处理对线虫侵染的影响

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

番茄(Lycopersicon esculentum cv.)佳粉19，种子购自北京蔬菜花卉研究所。