[发明专利]一种人源抗人IgE的抗体Fab片段、编码基因及用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种人源抗人IgE的抗体Fab片段、编码基因及用途，具体涉及应用天然人源免疫球蛋白基因文库筛选抗人IgE的人源抗体Fab片段、编码基因及用途。

背景技术

近年来，免疫球蛋白E(IgE)介导的过敏性疾病的发病率逐年上升，并且极大地危害着人们的健康。2005年8月，世界变态反应组织(WAO)于首个过敏性疾病日公布了全球30多个国家的调查结果，显示在这些国家总共12亿人口中，22％(2.5亿人)患有免疫球蛋白E(IgE)介导的过敏性疾病，如食物过敏、药物过敏、过敏性鼻炎、哮喘等。Marone等人于1966年首次从过敏性疾病患者血清中分离出IgE，世界卫生组织(WHO)于1968年确认其为一种新的免疫球蛋白。所述的IgE是由两条重链和两条轻链组成的四聚体，其重链恒定区与其高亲和力受体FcεRI的结合是过敏性疾发生的始动因素；IgE与其高亲和力受体FcεRI的结合部位是重链恒定区的第3段(Cε3)和第4段(Cε4)，恒定区的第2段(Cε2)对于结合常数及热力学参数等没有明显影响；因此，IgE与FcεRI的相互作用等同于IgE C3-C4与FcεRI的相互作用。IgE与肥大细胞或嗜碱性粒细胞表面的FcεRI结合后，可激活肥大细胞或嗜碱性粒细胞，使其脱颗粒，从而释放组胺等过敏介质最终导致过敏性疾病的发生。

目前，临床治疗常用的抗过敏疗法以脱敏疗法为主，抗炎和缓解症状是其主要目的，但是上述疗法有时会有严重的副反应。随着科技的不断进步，用于治疗过敏性疾病的抗体药物(抗IgE、抗L-4、抗CD23等)不断发展。2003年6月，人源化的抗IgE抗体药物索雷尔(omalizumab)被美国食品和药物管理局(FDA)批准上市，用于治疗过敏性哮喘；但由于该药物是对鼠的抗体进行人源化，所以有时会有严重的不良反应，美国FDA只建议12岁以上的患者使用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷和不足，提供一种人源抗人IgE的抗体Fab片段、编码基因及用途。

本发明所述的人源Fab抗体选自天然人源免疫球蛋白基因文库，为以重组IgEC3-C4蛋白筛选天然人源免疫球蛋白基因文库，并经过ELISA测序分析等从库中筛选到抗人IgE的人源抗体Fab片段，经大量的表达纯化及进一步的鉴定，证实所述的人源抗人IgE的抗体Fab片段能特异性识别人IgE，并与其有较高的亲和力，同时可抑制IgE介导的肥大细胞脱颗粒和组胺释放。

本发明与现有人源化的抗IgE抗体药物索雷尔(omalizumab)相比，构建的基因文库是以人的外周血淋巴细胞cDNA为模板，所得抗体的基因完全为人来源，即所得抗体为完全人源的抗体，没有人鼠嵌合抗体的人抗鼠抗体反应，可长期而安全的用于治疗。

具体而言，本发明提供了下述能编码识别人IgE的人源Fab片段及其编码基因，然而产生本发明的基因序列的方法不受特别的限制。

本发明所述的人源抗人IgE的抗体Fab片段的编码基因，包括轻链V区和重链V区；所述轻链V区的基因含有序列1的核苷酸序列，所述重链V区的基因含有序列17的核苷酸序列；

所述的轻链V区含有序列2的氨基酸序列；

所述的轻链V区由互补决定区(complementarity-determining region，CDR)和框架区FR(framework region，FR)构成；所述CDR含有序列6、10和14的氨基酸序列；所述的FR含有序列4、8、12和16的氨基酸序列；

所述的重链V区含有序列18的氨基酸序列；

所述的重链V区由互补决定区CDR和框架区FR构成；所述CDR含有序列22、26和30的氨基酸序列；所述的FR含有序列20、24、28和32的氨基酸序列。

本发明中，所述的人源抗人IgE的抗体Fab片段通过下述方法制得：

通过构建天然人源免疫球蛋白基因文库并通过克隆印迹法、ELISA、测序分析从所构建的天然人源免疫球蛋白基因文库中筛选，得到抗人IgE的人源抗体Fab片段，进行表达纯化及与IgE C3-C4的亲和力测定；通过体外抑制IgE介导的肥大细胞脱颗粒和组胺释放实验，证实抗人IgE的人源抗体可抑制肥大细胞脱颗粒和组胺释放。

本发明中，含有编码本发明的抗人IgE人源抗体Fab片段基因的质粒载体构成了本发明的一个部分。