[发明专利]用于吗啡检测的试纸条制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及用于吗啡检测的试纸条的制备方法，还涉及用于吗啡检测的试纸条的应用。 

背景技术

吗啡（Morphine）是由阿片提炼的一种阿片生物碱，为纯粹的阿片受体激动剂，有强大的镇痛作用，故在医学上，吗啡为麻醉性镇痛药。该类物质于使用初有欣快感，无法集中精神，会产生梦幻现象，过量使用造成急性中毒，极易产生耐受性和成瘾。 

目前，检测食品药品中吗啡，运用比较成熟的检测方法薄层色谱法(LC)、气相色谱法(GC)、液相色谱法(HPLC)，液质联用法等。这些方法虽有力的加强了对食品药品的监管, 但是各具有优势但具有明显的缺陷，液相、气相、液质联用等仪器分析因仪器价格昂贵，需要特定的实验室，检测周期长，一般需要一天的时间，需要专业人员的操作；薄层层析法操作繁杂，而且由于被测样品中往往含有多种香料，对实验造成严重干扰，可能得到不准确结果。 

发明内容

本发明的目的在于提供用于吗啡检测的试纸条制备方法及其应用。 

本发明所采取的技术方案是： 

用于吗啡检测的试纸条制备方法，包括如下步骤：

1)   制备胶体金标记抗吗啡单克隆抗体，将其包被在胶体金结合垫上；

2)   制备吗啡与BSA的偶联物，将其和羊抗鼠IgG喷在硝酸纤维素膜上，分别作为检测线和控制线，干燥；

3)   试纸条组装：试纸条由PVC模板和PVC背板组成，在PVC背板上按顺序粘上样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。

优选的，步骤3）硝酸纤维素膜从样品垫到吸水垫方向依次喷有检测线、控制线。 

优选的，步骤3）PVC背板上粘贴的各部分间有1～2mm的重叠。 

上述的用于吗啡检测的试纸条在食品、药品中的应用。 

本发明的有益效果是： 

本发明的用于吗啡检测的试纸条，专属性强、灵敏度高，准确度高，不需要专门设备，适合于现场操作，操作人员没有专业知识也可快速掌握，非常适合监督执法部门日常监督中使用，能够满足基层的监督检验需求，广泛应用于食品、药品的检测。

附图说明

图1是用于吗啡检测的试纸条操作示意图； 

图2是用于吗啡检测的试纸条结果判断图；

图3是阳性样品与阴性样品检测结果对比图。

具体实施方式

为便于对本发明进一步理解，现结合具体实施例对本发明进行详细描述。用于吗啡检测的试纸条制备方法，包括如下步骤： 

1.    制备胶体金标记抗吗啡单克隆抗体

胶体金颗粒的大小平均为30nm，在100ml去离子水中加入1%柠檬酸三钠1ml，煮沸后迅速加入1%氯金酸1ml，继续煮沸5min，冷却后，得胶体金溶液，4℃下保存备用。

取已制备好的胶体金溶液100ml，用0.2mol/L碳酸钠溶液调pH到8.0。边搅拌边加入抗吗啡单克隆抗体1.5mg，搅拌30min，再逐滴加入10ml 10%BSA，搅拌15min。12000G离心15min，弃上清液，加入10mlpH7.4PBS缓冲液(含1%BSA)，共清洗3次。将沉淀用5ml含1%BSA的PBS缓冲液(pH7.4)溶解，用0.2μm无菌过滤器过滤后，得胶体金标记抗吗啡单克隆抗体，4℃保存备用。     

2.  制备吗啡与BSA的偶联物

吗啡是小分子化合物，分子量为285，具有氢化毗咤菲的绸环母核，3位的酚轻基、6位的醇轻基活性较强，其本身无免疫原性，采用一氯醋酸钠法和唬拍酸配法合成唬拍酞化吗啡半酷，在EDC催化下，与大分子载体蛋白交联，形成3位、6位偶联复合物，

包被抗原为吗啡与BSA的偶联物(MOP-BSA)，其合成方法为：先将20mg吗啡琥珀酸盐、15mgEDC及30mgBSA混合溶于1mlTris缓冲液中，0～4℃下避光搅拌1h，再加入5mgEDC，在0℃下搅拌反应12h，静置过夜后，用Tris缓冲液透析3d，得吗啡与BSA的偶联物。

3.  包被抗体及偶联物 

    用BioJetXYZ3000型点膜仪将吗啡与BSA的偶联物及羊抗鼠IgG喷在硝酸纤维素膜（NC膜）上，分别作为检测线(T)和控制线(C)，在37℃烘箱干燥8h。以同样方法，将制备好的胶体金标记抗吗啡单克隆抗体包被在胶体金结合垫上。

4.  用于吗啡检测的试纸条组装