[发明专利]致病杆菌抗菌肽及其在抑制病原真菌和细菌生长中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种含有不多于20个氨基酸的肽段。

背景技术

抗菌肽是一类具有抗菌活性的多肽类物质，其分子量通常在几百到一万道尔顿之间，氨基酸个数从几个到几十个不等。因为其具有性质稳定、广谱抗菌、且不易产生耐受菌株等诸多优点而备受青睐。另有报道，抗菌肽是先天免疫反应中进化比较保守的一种产物，几乎所有生物都存在抗菌肽。申请人从昆虫病原线虫共生菌中挖掘新结构的抗菌肽，不仅可以提供宝贵的抗菌资源，而且为共生菌的开发利用开辟了新的途径。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种能抑制病原真菌和细菌生长的致病杆菌(Xenorhabdus budapestensis NMC-10)抗菌肽及其应用。

一种致病杆菌抗菌肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明还涉及致病杆菌抗菌肽在抑制病原真菌生长中的应用。

本发明致病杆菌抗菌肽在抑制病原真菌生长中的应用，其中所述病原真菌为辣椒疫霉菌、大丽轮枝菌、禾谷镰刀菌和/或灰葡萄孢菌。

本发明还涉及致病杆菌抗菌肽在抑制细菌生长中的应用。

本发明致病杆菌抗菌肽在抑制细菌生长中的应用，其中所述细菌为枯草芽孢杆菌、番茄疮痂病菌、青枯菌、普通变形杆菌和/或巨大芽孢杆菌。

本发明与现有技术不同之处在于提供一种致病杆菌抗菌肽，1.0μg/ml的该抗菌肽用于抑制病原真菌生长时，对辣椒疫霉菌、大丽轮枝菌、禾谷镰刀菌和灰葡萄孢菌的抑制率分别为60.01％、74.00％、49.21％、60.71％；1.0μg/ml的该抗菌肽用于抑制细菌生长时，对枯草芽孢杆菌、番茄疮痂病菌、青枯菌、普通变形杆菌和巨大芽孢杆菌分别能形成19.04±0.2mm、16.47±0.35mm、10.75±0.41mm、10.3±0.33mm、7.3±0.28mm的抑菌圈。

下面结合附图对本发明致病杆菌抗菌肽及其在抑制病原真菌和细菌生长中的应用作进一步说明。

附图说明

图1是通过不同饱和度的硫酸铵沉淀所获得沉淀物的抑菌活性；

图2是NMC-10粗提物进行离子交换层析的层析图，其中“Q穿”表示穿透峰、E1表示第一洗脱峰、E2表示第二洗脱峰；

图3A是离子交换层析收集的各组分对辣椒疫霉菌的抑制作用；其中：“总”表示NMC10粗提物，“穿”表示穿透峰组分，E1表示第一洗脱峰组分、E2表示第二洗脱峰组分；

图3B是离子交换层析收集的各组分对枯草芽孢杆菌的抑制作用；其中：“总”表示NMC10粗提物，“穿”表示穿透峰组分，E1表示第一洗脱峰组分、E2表示第二洗脱峰组分；

图4是离子交换层析收集的各组分进行Tricine-SDS-PAGE的电泳图；其中：“稀释总”表示稀释过的NMC10粗提物，“Q穿”表示穿透峰组分，E1表示第一洗脱峰组分、E2表示第二洗脱峰组分；

图5是穿透峰组分进行反相层析的图谱；图中5-10代表反相层析中收集管的编号；

图6是反相层析中收集的各组分对辣椒疫霉菌的抑制作用；图中1-10代表反相层析中收集管的编号；

图7是将活性最强的收集管5-8中的组分分别稀释2、8、64倍后测定其对辣椒疫霉菌的抑制作用，图中5A、5B、5C分别表示收集管5中的组分稀释2、8、64倍，图中6A、6B、6C分别表示收集管6中的组分稀释2、8、64倍，图中7A、7B、7C分别表示收集管7中的组分稀释2、8、64倍，图中8A、8B、8C分别表示收集管8中的组分稀释2、8、64倍；

图8是收集管8中的组分再次进行反相层析的图谱，2C2-12，2D9-12都表示收集管的编号；

图9A是再次进行反相层析时收集的各组分进行Tricine-SDS-PAGE的电泳图，2C2-3和2C4都表示收集管编号；

图9B是再次进行反相层析时收集的各组分对辣椒疫霉菌的抑制作用；

图10是2C2-3继续进行反相层析分离纯化时获得的一个组分质谱图。

具体实施方式

实施例1 致病杆菌培养及发酵代谢液制备