[发明专利]肌肉组织特异性表达Follistatin以提高牛瘦肉率的转基因载体

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种肌肉组织特异性表达Follistatin以提高牛瘦肉率的转基因载体。

背景技术

牛肉作为中国人民的主要肉类食品之一，保证全国人民有充足的、优质的牛肉供应是关系到人民日常生活的重要事件。而随着人口的增长和人民生活水平的提高，除了对牛肉的需求量增加以外，对牛肉的质量和口感的要求也提高了。因此，有必要建立和改良中国自己的牛的品种，改善牛肉口感和质量，以满足人民群众的生活需求。

Follistatin是由肌肉细胞分泌到血液中的一种糖蛋白，它可与抑制肌肉生长的Myostatin结合，从而拮抗Myostatin的功能，进而促进肌肉的生长。已在小鼠和猴中通过实验证明，将表达Follistatin的腺病毒群(Adeno-associated Virus)注射到肌肉中，可有效地促进肌肉的生长，不仅提高了肌肉的重量，还增强了肌肉的力量(Haidet A.M.et al.″Long-term enhancement of skeletal muscle mass and strength by single gene administration of myostatin inhibitors.″Proc Natl Acad Sci USA，2008.105：4318-4322；Kota，J.et al.“Follistatin gene delivery enhances muscle growth and strength in nonhuman primates”.Sci Transl Med，2009.1，6ra15)。基于这些数据，我们预期在牛的骨骼肌中过表达Follistatin可提高牛的瘦肉率，并可改善肌肉的品质。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是一种能在肌肉组织特异性表达Follistatin以提高牛瘦肉率的转基因载体。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种能在肌肉组织特异性表达Follistatin以提高牛瘦肉率的转基因载体包含小鼠的肌酸激酶(muscle creatine kinase，MCK)增强子、2.7kb牛的α-骨骼肌肌动蛋白(α-skeletal actin)基因的启动子、牛的Follistatin的cDNA和牛生长激素基因(bGH)的3’端不翻译区域，且带有哺乳动物细胞中筛选用的抗性基因-嘌呤霉素(Puromycin)基因和原核细胞中筛选用的抗性基因-博莱霉素(Zeocin)基因(见图2)。

2.7kb的α-骨骼肌肌动蛋白(α-skeletal actin)的启动子可保证下游的基因在骨骼肌中特异表达，而且MCK增强子也具有肌肉组织特异性的增强子活性，可特异地促进下游基因的高表达。在此转基因载体中表达的是牛自身的Follistatin基因，所以从食品安全的角度讲，对消费者的健康没有任何影响。此外，本发明在嘌呤霉素和博莱霉素抗性基因的两端还加入LoxP序列，这样，在Follistatin基因整合到基因组DNA后，如有需要，本发明可通过表达Cre蛋白，诱导LoxP序列的重组，以除去抗性基因，进一步保障转基因动物的食品安全性。

本发明构建的肌肉组织特异表达牛Follistatin的转基因载体pHJ20的全序列如SEQ ID No：1所示，其中第5-1039碱基为牛Follistatin编码区，第1059-1272碱基为bGH 3’端不翻译区，第1448-1481碱基为LoxP，第1837-2508碱基为嘌呤霉素抗性基因，第2566-2937碱基博莱霉素(Zeocin)抗性基因，第2952-2985LoxP碱基为4458-4804 MCK增强子，第5110-7857碱基为牛α-骨骼肌肌动蛋白基因的启动子。

本发明的转基因载体可应用于体细胞克隆，以构建高瘦肉率的Follistatin^mus转基因牛。

附图说明

图1是本发明的技术流程图。

图2是本发明构建的pHJ20转基因载体的示意图。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1：插入LoxP-Puro-Zeo-LoxP片段，构建pZT1。