[发明专利]一种荧光假单胞菌制剂及其应用

说明书

技术领域：

本发明涉及一种具有降解尼古丁的荧光假单胞菌制剂及其应用，属微生物技术领域。

背景技术：

尼古丁(1-甲基-2-(3-吡啶基)吡咯烷)烟草中的重要植物碱，含量约为烟叶干重0.17-4.93％。中国是最大的烟草生产国和世界上的消费国，约占全球30-35％。烟草对人体形成的满足感主要是因为尼古丁的作用。适当浓度的尼古丁保证了烟草的吸食特性。在香烟生产过程中，尼古丁的含量过高会增加烟气的刺激性，影响卷烟吸味，安全性也差。如何把烟草的尼古丁含量控制到人们所期望的范围，是烟草科技工作者和环境保护者研究的热点课题。另一方面，尼古丁可能污染环境和造成严重的生态问题。烟草生产过程的所有活动经常产生含有高浓度的尼古丁的固体或液体废弃物，而尼古丁是这些废弃物的主要有害成分。这些废物如不及时处理会给人们的生存和生活带来极大的危害。从烟草的利用和环境安全性的角度上，调整或降解尼古丁都是非常重要的。尼古丁的降解包括自然降解、化学降解和物理方法，这些使尼古丁降解或减少的方法中尼古丁的微生物降解引起了越来越多的关注。过去一段时间，越来越多的微生物被证明具有降解尼古丁的能力。例如，Arthrobacter nicotinoborans，A.globiformils，Nocardioides sp.，Achromobacter nicotinophagum，Rhodococcus sp.，Ochrobactrum intermedium，Pseudomonas putida，Pseudomonas convexa，Ensifer sp等。据可查资料，没有荧光假单胞菌能够降解尼古丁的报告。荧光假单胞菌在植物病害的生物防治上、在有机废弃物的生物治理中有着广泛地应用。

微生物在尼古丁的降解过程中涉及到多个途径，且在每个途径中涉及到多个酶促反应，因此，应用生物酶降解尼古丁还未见报道，但国内外有许多应用微生物活体降解尼古丁的案例。1997年Civilini等报道了采用P.putida和A.oxidans pAO1处理尼古丁废弃物的渗洗液，结果表明P.putida的处理效果最好。Brown & Williamson烟草公司利用纤维单胞菌来降低烟草中的尼古丁和硝酸盐含量。结果显示，将经过处理的白肋烟和其它烟叶混合，与未经处理的白肋烟叶片相比，混合烟丝的硝酸盐含量从1.63％降至1.04％，尼古丁从1.79％降至1.32％。将这些经过处理的混合烟丝制成卷烟后，烟气分析表明，硝酸盐、氰化氢和尼古丁各降低了38.8％、19.7％和15.3％。由此可见，通过微生物手段降低尼古丁含量和消除污染在生产中具有很高的实际应用价值，其意义不但能够提高烟叶资源的利用率，取得丰厚的经济效益，而且还能够改善生态环境，获得显著的社会效益，利用微生物降解尼古丁前景广阔。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种能够高效降解尼古丁、制备成本低的荧光假单胞菌制剂及其应用。

本发明是这样实现的：

1、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)1206的获得

所用培养基：富集培养基(EM)由以下成分构成：1.6g·l^-1 K₂HPO₄，0.4g·l^-1 KH₂PO₄，0.1g·l^-1 NaCl，0.2g·l^-1 MgSO₄·7H₂O，and 0.05g·l^-1 CaCl2，培养基pH调节到7.0，灭菌后培养基添加终浓度为1g·l^-1的过滤除菌的尼古丁作为唯一的碳源和氮源；分离培养基(IM)由每升EM添加1mL微量元素溶液(2gL^-1 MnSO₄·H2O，0.1gl^-1 CuSO₄·5H₂O，0.2gl^-1 ZnSO₄·7H₂O，0.2gl^-1 NaMoO₄·2H₂O)和15g琼脂组成。