[发明专利]猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬病二联活疫苗及其制备方法有效
申请号: | 201110331206.9 | 申请日: | 2011-10-27 |
公开(公告)号: | CN102727884A | 公开(公告)日: | 2012-10-17 |
发明(设计)人: | 武华 | 申请(专利权)人: | 华威特(北京)生物科技有限公司 |
主分类号: | A61K39/295 | 分类号: | A61K39/295;A61K48/00;A61P31/14;A61P31/22;A61K39/12;A61K39/245 |
代理公司: | 北京万慧达知识产权代理有限公司 11111 | 代理人: | 杨颖;张一军 |
地址: | 100085 北京市海淀区开*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 繁殖 呼吸 综合征 狂犬病 二联 疫苗 及其 制备 方法 | ||
1.一种疫苗组合物,含有猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗与猪伪狂犬疫苗。
2.根据权利要求1所述的疫苗组合物,其特征在于,所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗与猪伪狂犬疫苗之间基本上无免疫抑制。
3.根据权利要求2所述的疫苗组合物,其中所述猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗与所述猪伪狂犬疫苗的TCID50值的比例为1∶1到1∶0。
4.根据权利要求2所述的疫苗组合物,其中所述猪伪狂犬疫苗的基因组序列与NCBI参考号NC_006151的核苷酸序列具有至少80%的同源性。
5.根据权利要求4所述的疫苗组合物,其中所述猪伪狂犬疫苗的基因组序列中的一个或多个基因失活,所述基因选自下组:TK、PK、RR、dUTPase、gG、gC、gE、gD和gI。
6.根据权利要求5所述的疫苗组合物,其中所述猪伪狂犬疫苗的基因组序列中的gE基因失活。
7.根据权利要求1-6任一所述的疫苗组合物,其中所述猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗含有Nsp1核苷酸序列,所述序列的编码序列与SEQ ID NO:1具有至少90%的同源性。
8.根据权利要求7所述的疫苗组合物,其中所述猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗进一步含有Nsp2核苷酸序列,所述Nsp2核苷酸的编码序列与SEQ ID NO:2具有至少90%的同源性。
9.根据权利要求8所述的疫苗组合物,其中所述猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗含有由SEQ ID NO:1编码的Nsp1核苷酸序列,且含有由SEQ ID NO:2编码的Nsp2核苷酸序列。
10.根据权利要求1-6任一所述的疫苗组合物,其中所述猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗含有猪繁殖与呼吸综合征病毒的核苷酸序列,该序列的编码序列与SEQ ID NO:3其有至少90%的同源性。
11.根据权利要求10所述的疫苗组合物,其中所述猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗含有猪繁殖与呼吸综合征病毒的核苷酸序列,该序列由SEQ ID NO:3编码。
12.根据权利要求1或2所述的疫苗组合物,其进一步含有佐剂。
13.根据权利要求1或2所述的疫苗组合物,其进一步含有冻干保护剂。
14.根据权利要求13所述的疫苗组合物,其中所述冻干保护剂含有蔗糖、L-谷氨酸钠、或水解乳蛋白。
15.一种制备权利要求1或2所述的疫苗组合物的方法,包括:
(1)将猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株和猪伪狂犬病病毒弱毒株分别接种于各自的易感细胞,并培养所述接种后的易感细胞;
(2)收获并混合所述步骤(1)得到的细胞培养物中的病毒。
16.根据权利要求15所述的方法,其特征在于:步骤(1)中所述猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗的易感细胞为Marc-145细胞系、MA-104细胞系、Vero细胞系、CL-2621细胞系等传代细胞系或PAM细胞等原代细胞。
17.根据权利要求15所述的方法,其特征在于:步骤(1)中所述猪伪狂犬疫苗的易感细胞为ST细胞、PK-15细胞、Marc-145细胞、MDBK细胞、BT细胞、Vero细胞、BHK-21细胞、猪肾传代细胞(IBRS-2)、兔肾传代细胞(RK)、鸡胚成纤维细胞、或猪肾原代细胞。
18.根据权利要求15所述的方法,其特征在于:步骤(1)中所述的细胞培养方法为以下任意一种:在转瓶中培养,使其细胞密度达到:5×107/ml-1×108/ml;或者在生物反应器中添加附着载体进行悬浮培养,使其细胞密度达到5×108/ml-1×109/ml。
19.根据权利要求15所述的方法,其特征在于:步骤(1)中所述的猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗接种的感染剂量(MOI)为0.01-0.5。
20.根据权利要求15所述的方法,其特征在于:步骤(1)中所述的猪伪狂犬疫苗接种的感染剂量(MOI)为0.005-0.5。
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