[发明专利]一种可直接移栽的铁皮石斛育苗方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种组培方法，尤其是针对铁皮石斛的组培方法，属于生物技术领域。 

背景技术

石斛属植物中有不少是名贵中药，在《本草纲目》中石斛被列为上品。我国76种石斛属植物中有近40种作药用，著名的有金钗石斛、铁皮石斛、霍山石斛等，具有强阴益精、补肾益力、轻生延年等作用，其药用与保健功能日益被挖掘，其应用范围正迅速扩大。同时，石斛属植物约有四分之一可供观赏，以花艳丽而著称，近年作为观赏植物发展迅速，已形成独立产业。鉴于集药用和观赏于一体的价值，使之过度的采伐利用，加之其本体自然繁殖率低，造成了石斛供需之间的紧张状况，我国已将其列为濒于绝灭的受保护的中药品种之一。 

自1960年法国人Gmorel利用石斛基尖组织培养无病毒植株的无性繁殖技术创立以来，石斛组织培养技术逐步深化，尤其近年来石斛组织培养育苗逐步趋向产业化，石斛组织培养的最佳条件，包括适宜的光照、温度、湿度、pH以及如何选用外植体，如何配置营养适宜的培养液等都取得长足进展。但是通过传统的石斛组培方法，特别是铁皮石斛组培方法培育出来的苗种由于还不够壮实，生命力较弱，因此在移栽到自然环境中前都需要在大棚内进行3-5个月的训化（炼苗），而且其移栽后的生长周期较长，造成育苗成本较高。      

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种组培苗无需训化，而可直接移栽的铁皮石斛组培方法，提高了铁皮石斛组培苗的扩繁速度、生产质量、移栽成活率，并缩短了移栽后铁皮石斛的生长周期，提升了成年石斛的质量。 

为解决上述问题，本发明的铁皮石斛育苗方法包括下列步骤： 

1）将铁皮石斛的蒴果种子经消毒后，播入专用培养基Ⅰ+专用组培杯+专用培养室里，进行萌发培养，培养温度为24-26℃，湿度为65-75%，光照度为1000-2000lx，光照时间为10-12小时/日，培养45-60天，外植体萌芽形成绿色的原球茎；

2）将原球茎转入专用培养基Ⅱ+专用组培杯+专用培养室里，进行原球茎增殖、分化培养，培养温度为22-28℃，湿度为65-75%，光照度为1500-2500lx，光照时间为10-12小时/日，培养60天，由原球茎培育成1-2CM小苗，同时伴随着有部分新原球茎产生，再将小苗转入同样的组培杯、培养基和环境下继续培养1个月,将小苗培养成中苗，苗高为3-4cm；

3）将中苗转入专用培养基Ⅲ+专用组培杯+专用培养室里，培养温度为20-30℃，湿度为65-75%，光照度为2000-4000lx，光照时间为10-12小时/日，培养60天，由小苗培育成高为5-9CM，茎粗为 0.4-0.5CM的壮苗；

所述专用培养基Ⅰ包括1/2MS基本培养基+芋头汁15-25%(V/V)+琼脂4-6g/L，PH值为5.2-5.8；

所述专用培养基Ⅱ包括MS基本培养基+ BA(6-卞氨基腺嘌呤)0.1-0.2mg/L+琼脂4-6g/L+土豆汁6-10%(V/V)+香蕉汁10-14%(V/V)， PH值为5.4-5.8；

所述专用培养基Ⅲ包括MS基本培养基+ NAA (α-萘乙酸)0.1-0.2mg/L+香蕉汁8-10%(V/V)+土豆汁5-7%(V/V) +芋头汁8-12%(V/V) +琼脂4-6g/L，PH值为5.4-5.8；

所述专用组培杯为具有适度空间容积的透明的塑料杯体，所述塑料杯体杯口通过透明的塑料膜塑封，所述塑料膜上设置滤膜；

所述专用培养室为灭菌培养室，所述灭菌室采用自然光照，其顶端设置采光瓦和遮阳网，并设有温度湿度调节设备。

本发明的进一步优化方案，其特征在于所述塑料杯体为圆柱形，杯口直径为9-10cm, 杯底直径为5-6cm,杯高为9-10cm，壁厚0.15-0.25mm。 

所述的组培苗可直接移栽的铁皮石斛组培方法，其特征在于所述专用培养基Ⅰ包括1/2MS基本培养基+芋头汁20%(V/V)+琼脂5g/L，PH值为5.5。 

所述的组培苗可直接移栽的铁皮石斛组培方法，其特征在于所述专用培养基Ⅱ包括MS基本培养基+ BA(6-卞氨基腺嘌呤)0.15mg/L+琼脂5g/L+土豆汁8%(V/V)+香蕉汁12%(V/V)， PH值为5.5。 

所述的组培苗可直接移栽的铁皮石斛组培方法，其特征在于所述专用培养基Ⅲ包括MS基本培养基+ NAA (α-萘乙酸)0.15mg/L+香蕉汁9%(V/V)+土豆汁6%(V/V) +芋头汁10%(V/V) +琼脂5g/L，PH值为5.5。