[发明专利]一种样品印迹聚合物合成方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及高分子材料合成领域的一种分子印迹聚合物的合成方法，特别涉及一种样品印迹聚合物合成方法及其应用。

背景技术

分子印迹聚合物是在模板分子存在下合成的高分子材料。模板分子是所需或感兴趣的研究对象，当它(们)被去除之后，在聚合物中留下了特殊的孔隙或结合部位，可用于对模板分子的识别。分子印迹技术及所得聚合物广泛地应用于各种领域，包括传感器设计、催化、分离、分子识别、抗体模拟以及晶体工程等方面。蛋白质的印迹在分子印迹技术中占有重要地位。由于蛋白质的体积庞大，结构具有一定的柔性，通常采用非共价方式进行处理，比如表面印迹、纳米印迹、冷冻凝胶印迹等方式。

在本发明之前，现有分子印迹聚合物多是针对特定已知化合物，即使用已知模板分子合成印迹聚合物。目前，无论单一印迹还是多元印迹，已知标准物质的使用都是不可避免的，即不能对未知化合物进行印迹，任何印迹聚合物的合成都是以已知标准物质的获取为前提的。

为了处理复杂样品例如生物体液、或组织蛋白质提取液，通常需要对样品进行预先分离、处理。尤其是蛋白质组学、生物标记物的研究，常常希望对粗蛋白质样品进行预处理，从中除去高丰度(含量)的常见或称“看家蛋白质”。特定高丰度蛋白质的脱除通常使用亲和色谱方法，需要使用昂贵、难得的抗体等物质，方法实用面较窄且成本高昂，且印迹方法也需特定已知蛋白质标准品。

发明内容

本发明的目的就是要克服上述缺陷，研制一种样品印迹聚合物合成方法及其应用。

本发明的技术方案是：

一种样品印迹聚合物合成方法，其主要技术步骤在于：

(1)将丙烯酰胺、双丙烯酰胺、丙烯酸、烯丙基胺、过硫酸铵、四亚甲基二乙胺搅拌混匀成混合液；

(2)加入实际样品作为印迹模板，聚合后得到样品印迹聚合物。

本发明的另一技术方案是：

一种样品印迹聚合物的应用，其主要技术步骤在于：

(1)生物体液样品印迹聚合物置于玻璃滴管中制成过滤柱；

(2)生物体液样品溶于pH 8.6的磷酸盐缓冲溶液，过滤除去沉淀物；

(3)滴加通过过滤柱，取滤液进行毛细管电泳分离；

(4)电泳条件：电压10kV，检测波长280nm，毛细管长度20厘米有效长度；

(5)电泳结果表明聚合物脱除样品中高丰度蛋白质组分。

本发明的优点和效果在于本发明实现了无标印迹，即不使用纯化的标准化合物，模板分子是样品中的高丰度组分。得到的印迹聚合物恰好可以用来脱除或收集这些高丰度组分。

本发明的其他优点和效果将在下面继续说明。

附图说明

图1——人血清印迹聚合物实物照片示意图。

图2——印迹聚合物扫描电镜示意图。

图3——鸡蛋清印迹聚合物脱除高丰度蛋白质电泳示意图。其中，a)实际样品，b)印迹聚合物处理后的样品示意图。

图4——印迹聚合物可以同时脱除的部分蛋白质数据示意图。

图5——印迹蛋白质的一种——溶菌酶，电泳后从柱子中洗出。

具体实施方式

本发明的技术思路是：

在此我们提出新颖的印迹聚合物合成方法，印迹模板并非已知分子，而是实际样品如蛋白质混合物。具体的印迹分子涉及多种分子。混合物样品中的组分只要浓度超过某一阈值，且与聚合物单体相互作用足够有效，则该组分可以在合成聚合物中形成作用孔隙或位点。经过充分洗脱印迹模板，所得到的印迹聚合物对原来样品中浓度较高的几种组分具有特异吸附、捕获作用。

下面是具体技术说明：

(1)将丙烯酰胺、双丙烯酰胺、克丙烯酸、克烯丙基胺、过硫酸铵、四亚甲基二乙胺搅拌混匀成混合液；

(2)加入生物体液或组织蛋白质提出取液，超声脱气，置于温水浴中聚合，得到白色固体；

(3)用磷酸盐缓冲溶液充分洗涤，干燥得到成品。

实施例1：

1)人血清样品印迹聚合物合成：100毫升蒸馏水中加入1.0克丙烯酰胺、0.05克双丙烯酰胺、0.01克丙烯酸、0.01克烯丙基胺、0.015克过硫酸铵、10微升四亚甲基二乙胺，搅拌混匀，加入10毫升人血清，超声脱气10分钟，置于40℃水浴中聚合10小时，得到白色固体，如图1所示；用0.50mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH 8.6，含10mmol/L十二烷基磺酸钠)充分洗涤，干燥得到成品，如图2所示；动物血清样品印迹聚合物合成与此类似。

实施例2：