[发明专利]一种消除内源性胱硫醚干扰的血清同型半胱氨酸测定方法及试剂

说明书

技术领域

本发明涉及医学检验测定技术领域，特别是一种消除内源性胱硫醚干扰的血清同型半胱氨酸测定方法及试剂。

背景技术

血清/浆同型半胱氨酸(homocysteine，HCY)是一种含硫分子的氨基酸，在身体内经由甲硫氨酸(methionine)代谢后而得到的中间代谢产物。众多临床资料已经证实HCY是心脏冠状动脉硬化、心肌梗塞、脑中风和末梢血管阻塞的重大危险因子。长久以来，医学上都认为心脏疾病与胆固醇增加有关，但是却仍有25％的心脏病患者在体内没有明显的胆固醇或其它危险因子升高的现象。上世纪60年代末期，一些学者注意到患有遗传性高胱氨酸尿症的病人，大多数伴有亚临床心血管病。1976年，Wichen等通过流行病学调查提出同型半胱氨酸是心血管病人一个独立危险因素，但一直未受到人们重视。近年来的研究发现，同型半胱胺酸HCY的代谢与心血管疾病或中风有极大关联。动物试验表明，应用3％蛋氨酸饮食长期喂养家兔，诱发同型半胱氨酸血症，家兔血中甘油三酯、游离脂肪酸、脂质过氧化物含量均明显升高，病理检查表明主动脉脂肪大量沉积，并发生动脉粥样硬化。Glueck等报道，他们对482例高血脂病人进行分析，18例患者同时伴有血浆同型半胱氨酸含量升高。其中13人患有动脉粥样硬化，发病率为72％，远高于血浆同型半胱氨酸含量正常的高血脂患者。在18例高同型半胱氨酸血症患者的直系亲属中动脉粥样硬化的发病率可达78％。目前，HCY对心血管疾病的诊断意义已被临床充分重视。

由于同型半胱氨酸测定对心血管疾病的诊断有较好的特异性和灵敏度，在近20年中，测定方法得到不断开发和改进。主要有高效液相色谱法(HPLC)、荧光偏振免疫测定法(FPIA)、酶联免疫分析法(ELISA)、毛细管电泳-激光诱导荧光(CE-LIF)等。这些方法需要对HCY进行衍生和复杂的样品前处理，同时需特殊、昂贵仪器，不适合临床常规分析。近几年来，利用酶法测定HCY的方法得到了开发和改进，目前临床上主要应用美国Teco Diagnostics公司的Homocysteine Reagent(下称“Teco法”)进行HCY的测量，该法通过循环酶反应将HCY转化为丙酮酸钠，然后用测定丙酮酸钠的方法对HCY进行定量，此法灵敏度高，可应用于临床广泛使用的全自动生化分析仪，从而实现HCY的自动化分析，但该法无法排除内源性胱硫醚干扰，易使HCY测定结果假性升高。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够消除内源性胱硫醚干扰，测定结果真实、准确的血清同型半胱氨酸测定方法及试剂。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术解决方案：一种消除内源性胱硫醚干扰的血清同型半胱氨酸测定方法，其特征在于它包括以下步骤：

(1)配制含胱硫醚裂解酶(CBL)、还原性辅酶I(NADH)、乳酸脱氢酶(LDH)、海藻糖的pH8.50-9.00Tris-HCl缓冲液为试剂I，按一定比例加入含内源性干扰物质胱硫醚的待测同型半胱氨酸(HCY)血清样品，监测340nm处吸光度的降低值，与标准液对照后计算出由干扰物质胱硫醚转化生成的同型半胱氨酸浓度C_hcy，1；

(2)配制含丝氨酸、胱硫醚合成酶(CBS)、海藻糖的pH7.50-7.80Tris-HCl缓冲液为试剂II，将试剂II按一定比例加入到第(1)步试剂I和待测血清样品的混合溶液中，监测340nm处吸光度下降速率，与标准液对照后计算出同型半胱氨酸总浓度C_hcy，2；

(3)将第(2)步所测得的同型半胱氨酸总浓度C_hcy，2减去第(1)步所测得的同型半胱氨酸浓度C_hcy，1得血清同型半胱氨酸(HCY)浓度C_血清hcy。

步骤(1)中的反应条件为在37℃环境中反应180-600秒；步骤(2)中的反应条件为在37℃环境中反应90-480秒。

步骤(1)中，所述血清样品与所述试剂I的体积比为V_血清∶V_试剂I＝16.5∶250；

步骤(2)中，所述血清样本与所述试剂I、试剂II的体积比为V_血清∶V_试剂I∶V_试剂II＝16.5∶250∶50。