[发明专利]靶向抑制PPP2R5C基因表达和肿瘤T细胞增殖的PPP2R5C-siRNA799及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种siRNA，特别涉及一种靶向抑制PPP2R5C基因表达和肿瘤T细胞增殖的PPP2R5C-siRNA799及其应用。

背景技术

血液肿瘤是发病率较高的恶性肿瘤之一，每年全国约有10万初发病人，严重危害人们、尤其是青少年的健康。T细胞肿瘤是血液肿瘤的一种主要类型，主要由于T细胞恶性克隆增殖而形成，包括多种类型的T细胞白血病和淋巴瘤，多数恶性程度高，治疗效果差，预后不良。临床治疗上一直存在难治疗、耐药和易复发等难题，因此寻找更有效和特异的治疗方案一直是研究者的一个重要目标。随着对肿瘤细胞分子特点的逐渐明确，不断发现肿瘤T细胞特异的分子，设计和研制有效的靶向治疗药物，成为提高T细胞肿瘤治疗效果的一个重要手段。

PPP2R5C基因是在1996年被发现并克隆出来的。是蛋白磷酸酶2A(PP2A)的一个亚单位，在调节细胞增殖、分化和转化等过程中具有重要作用，目前研究认为其属于一种抑癌基因。近期研究提示其表达模式的改变与细胞恶性转化相关，我们的前期研究也发现PPP2R5C在T细胞肿瘤中有异常高表达情况。

近年来，利用RNA干扰技术，将化学合成的小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)转导至特定的细胞，沉默相关基因的表达，是研究基因功能最有效的手段之一，也是靶向基因治疗最有吸引力的方法之一。选择特异性的靶基因合成有效的siRNA，并且选择合适转染方式，使其在宿主细胞中高效作用，是实施这一靶向治疗措施的重点。靶向针对PPP2R5C基因的siRNA序列对于开发新的抗T细胞肿瘤基因药物和提高T细胞肿瘤的治疗效果有重要的意义，具有很大的应用前景和经济价值。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种靶向抑制PPP2R5C基因表达和肿瘤T细胞增殖的siRNA，名称为PPP2R5C-siRNA799。

本发明的另一目的在于提供上述PPP2R5C-siRNA799的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种靶向抑制PPP2R5C基因表达和肿瘤T细胞增殖的PPP2R5C-siRNA799，核糖核苷酸序列如下所示：

正义链：5’-GCAUAGCAGAGUUACUGGAAAUAUU-3’；

反义链：5’-AAUAUUUCCAGUAACUCUGCUAUGC-3’。

所述的靶向抑制PPP2R5C基因表达和肿瘤T细胞增殖的PPP2R5C-siRNA799用于制备抑制PPP2R5C基因表达的制剂。

所述靶向抑制PPP2R5C基因表达的siRNA应用于制备治疗T细胞肿瘤的药物。

所述T细胞肿瘤为T细胞白血病。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

1、本发明所提供的PPP2R5C-siRNA799能高效抑制PPP2R5C基因的表达，mRNA的下调程度达到2～4倍，蛋白表达明显得到抑制，如图2和图3所示。

2、本发明所提供的PPP2R5C-siRNA799能有效抑制肿瘤性T细胞的增殖，如图4所示。

3、本发明所提供的PPP2R5C-siRNA799对于开发新的抗T细胞肿瘤基因药物和提高T细胞肿瘤的治疗效果有重要的意义，其具有很大的应用前景和经济价值。

附图说明

图1是实施例1中通过流式细胞仪检测Molt-4细胞转染效率图，其中：

A为转染Alexa Red Oligo的柱形图；

B为对照组的柱形图。

图2是实施例2的实验组和对照组的实时定量PCR结果图。

图3是实施例2的实验组和对照组的Western Blot图(RNA干扰后48h)。

图4是通过Annexin V/PI双染后流式细胞仪得到的实验组和对照组的细胞凋亡图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

siRNA的合成和转染T淋巴细胞白血病细胞株(Molt-4)(购自中科院上海细胞所)细胞条件的稳定，具体步骤如下：

(1)设计和得到siRNA