[发明专利]鉴别从人或动物生物体液中富集的非血源性有核细胞的方法

说明书

技术领域

本发明主要涉及使用同步免疫荧光原位杂交技术鉴定从人或动物生物体液中富集的恶性上皮来源(实体肿瘤)或非上皮来源(黑色素瘤)的肿瘤细胞。 

背景技术

提取并检测人生物体液(胸水或胸腔积液，腹水或腹腔积液，脑脊液，淋巴液及/或血液等)中的恶性上皮细胞(肿瘤细胞)的巨大现实及潜在的临床意义早已被人们所证实。在许多采集的人的生物体液样本中，常常混有大量的红细胞及白细胞.从而对实验操作及结果的判别造成极大干扰.目前临床或医学实验中通用的去除红细胞的方法是使用低渗裂解法裂解去除红细胞.然而在低渗裂解过程中，伴随着红细胞的裂缝，许多恶性上皮细胞(肿瘤细胞)也受到了一定程度的损害，使细胞形态与特性发生改变，从而影响对这类细胞的正确判别。 

荧光原位杂交(Fluorescence in situ Hybridization，FISH)技术用于病理组织中的肿瘤细胞检测已有广泛报道。其中一项主要技术应用即为使用荧光标记的染色体着丝粒特异探针对体液中处于间期的肿瘤细胞进行染色体数目的识别(正常细胞染色体为二倍体)，以发现存在于肿瘤细胞内的非二倍体染色体，即超二倍体或多倍体染色体，从而达到识别肿瘤细胞的目的。FISH方法以往已被较多地使用在血液病肿瘤的诊断中，但用于检测体液包括血液中的实体瘤细胞(非血液病肿瘤)的报道却极为罕见。应用FISH方法从血标本中检测肿瘤细胞最常见的问题就是如何区分血缘性 非正常染色体数目的细胞，这类细胞可见于血小板增生引起的血中某些白细胞染色体数目异常，或人体内自然形成的某些少量白细胞染色体数目异常，以及染色体探针非特异着色引起的血细胞假阳性染色体数目异常。所以在进行FISH识别判断血液中的非血缘性实体瘤细胞时，有效区分血缘性与非血缘性细胞具有极其重要的意义。然而这方面的研究还没有任何报道。 

除此之外，虽然个别文章报道了基于肿瘤上皮细胞染色基础之上的非同步FISH方法用于检测血中的循环肿瘤细胞，即FISH与抗肿瘤细胞标识物抗体染色非同步交替进行，但考虑到大量脱落的实体瘤肿瘤细胞在液体环境中因生长环境发生了彻底改变而丧失了肿瘤上皮细胞的特性，而直接影响对肿瘤细胞的抗体免疫染色，从而造成大量假阴性，所以不具备任何临床使用价值。 

由于上述原因，本发明将基于利用一种密度分离剂(即细胞分离介质)的组合物的离心方法用于将人的生物体液中的红细胞与恶性上皮细胞及其它有核细胞进行快速有效的分离，在无融破裂解红细胞实验步骤的情况下取得了令人意料不到的实验结果，证明利用此组合物能够快速、高效地将人的体液样品中的绝大部分红细胞及血浆蛋白质与体液标本中的其它有核细胞包括肿瘤细胞进行有效分离，不会对人的体液内的靶细胞(如体液中的肿瘤细胞)产生任何影响，从而很好地保持了原有的细胞形态，以极大地便于后续的细胞识别与判断。在使用免疫磁珠去除白细胞后，能够快速富集并提取生物体液中的非血源性恶性上皮细胞(肿瘤细胞)及血管内皮细胞等。在后续使用FISH方法进行鉴别非血源性恶性上皮细胞时，同步使用抗人白细胞表面抗原的抗体进行免疫荧光染色以排除任何血源性细胞的干扰，从而对人的生物体液样本中富集的非血源性恶性肿瘤细胞进行快速、准确的鉴别。 

发明内容

本发明涉及一种鉴别从人或动物生物体液中富集的非血源性恶性有核细胞的方法，其中同步实施抗人或动物白细胞抗体免疫荧光染色以及染色体荧光原位杂交以区别血源性有核细胞。非血源性恶性有核细胞例如是肿瘤细胞或血管上皮细胞。 

用于所述免疫荧光染色的抗人或动物白细胞抗体特异性地识别下述人的白细胞表面标示物的一种或多种的抗原：CD3、CD31、CD34、CD45、CD50、CD69、CD84、或CD102。 

用于所述染色体荧光原位杂交的荧光标记的探针或探针组合群可特异性地识别人或动物的任何一个或多个染色体。