[发明专利]一种EGFR与HER2联合多肽表位疫苗

权利要求书

1.一种EGFR与HER2联合多肽表位疫苗，其特征在于，将HER家族HER2的两 个B细胞表位模拟多肽I和II、HER家族EGFR的一个B细胞表位模拟多肽以串联的 形式插入到乙肝核心抗原HBcAg的第78位氨基酸与第79位氨基酸之间，构成的融合 蛋白即为联合多肽表位疫苗；

其中，所述的HER家族HER2的B细胞表位模拟多肽I，其氨基酸序列如SEQ ID No： 2所示，编码该氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示；

所述的HER家族HER2的B细胞表位模拟多肽II，其氨基酸序列如SEQ ID No：4 所示，编码该氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID No：3所示；

所述的HER家族EGFR的一个B细胞表位模拟多肽，其氨基酸序列如SEQ ID No： 6所示，编码该氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ ID No：5所示；

所述的乙肝核心抗原HBcAg，其氨基酸序列如SEQ ID No：8所示，编码该氨基酸 序列的核苷酸序列如SEQ ID No：7所示；

所述的融合蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No：10所示，编码该氨基酸序列的核苷 酸序列如SEQ ID No：9所示。

2.权利要求1所述的EGFR与HER2联合多肽表位疫苗的制备方法，其特征在于， 该方法包括如下步骤：

(1)使用重叠PCR技术构建融合蛋白基因；

(2)将步骤(1)得到的融合蛋白基因经双酶切基因后与经过双酶切消化的表达载 体pET28a连接，构建重组表达载体：

(3)将步骤(2)得到的重组表达载体转入大肠杆菌表达系统，构建重组菌表达融 合蛋白；

(4)将步骤(3)得到的表达后的重组菌经细胞破碎，释放出包涵体形式的融合蛋 白，洗涤后，用尿素变性，再经透析复性，获得可溶性的融合蛋白即为EGFR与HER2 联合多肽表位疫苗。

3.根据权利要求2所述的EGFR与HER2联合多肽表位疫苗的制备方法，其特征 在于，步骤(1)中，所述的融合蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID No：9所示，即如 SEQ ID No：1、SEQ ID No：3和SEQ ID No：5所示的核苷酸序列顺序连接插入如SEQ ID：No：7所示的核苷酸序列的第234和第235个碱基之间。

4.根据权利要求1所述的EGFR与HER2联合多肽表位疫苗的制备方法，其特征 在于，步骤(1)中，使用重叠PCR技术构建融合蛋白基因的具体方法如下：利用引物 P1和P2互为模板扩增出片段FI；以FI为模板，P5和P6为引物进行PCR扩增出片段 FII；以pHBc为模板，P3和P4、P7和P8为引物分别进行PCR扩增出片段FIII和FIV； 以FII、FIII为模板，P3和P6为引物进行PCR，扩增出片段FV；以FIV和FV为模板， P3和P8为引物进行PCR，扩增出融合蛋白基因。