[发明专利]低甲基化基因POTEH的应用方法

说明书

技术领域

本发明涉及低甲基化基因POTEH在制备脑胶质瘤病人预后预测试剂中的应用。 

背景技术

目前的研究将表观遗传学定义为DNA序列不发生改变的可遗传性的基因表达变化。表观遗传调控机制包括DNA甲基化、组蛋白修饰及microRNAs。至今，大量的研究发现表观遗传机制在多种肿瘤(包括胶质瘤)的发生发展中发挥着重要作用。现有的研究显示，全基因组低甲基化在胶质瘤母细胞瘤中发生率约为80％，而且单拷贝基因与重复序列在胶质瘤中也能发生低甲基化。 

胶质瘤是人类最常见且恶性程度非常高的中枢神经肿瘤，随着医疗水平的不断提高，许多肿瘤病人的5年或10生存率明显提高，但是胶质瘤病人的预后仍未得到明显改善，其5年生存率低于25％，而胶质瘤母细胞瘤的病人总生存时间平均为12.3个月。目前，对脑胶质瘤的预后判定没有参考标准，也没有特异性的指标，远远不能适应对人脑胶质瘤进行预后判定的需求。因此，对人脑胶质瘤进行预后判定，以便选择最佳治疗方案，显著提高患者生存率，成为科学研究亟待解决的重要课题。 

POTEH基因(POTE ankyrin domain family，member H)定位于染色体22q11.1，GeneBank登录号：NM_001136213，又称A26C3(ANKRD26-like family C member 3)，是POTE家族成员，包含7个ANK重复序列。多项研究表明，POTE家族表达仅限于少数组织，如前列腺、睾丸、卵巢及胎盘等。但是该家族成员在乳腺癌、前列腺癌及多种恶性肿瘤中高表达。申请人用免疫组织化学法检测POTEH蛋白在正常脑组织及脑胶质瘤组织中的表达，结果显示POTEH在胶质瘤中表达增加(p＜0.05，图1)，高级别胶质瘤组织(III级、IV级)中POTEH的表达较低级别(I级、II级)增加，差异有统计学意义(p＝0.008)。亚硫酸氢盐测序PCR(BSP)证实，POTEH在胶质瘤中发生低甲基化(p＜0.001)。然后用SPSS 13.0软件对POTEH蛋白表达与POTEH基因低甲基化进行相关性分析，结果表明两者间存在相关性(p＜0.05)，说明表观遗传学可能参与了POTEH基因的表达调控。 

利用亚硫酸氢盐测序PCR法(BSP)分析所获得的肿瘤特异性甲基化状态，是甲基化分析的金标准，它能明确所测区域每一个CG位点的甲基化状态。 

发明内容

本发明的目的是提供一种低甲基化基因POTEH的应用方法，对于脑胶质瘤的预后预测具有重要意义。 

低甲基化基因POTEH用于制备脑胶质瘤诊断、预测、检测或筛查制剂；特别是用于制备脑胶质瘤诊断、预测、检测或筛查的试剂盒。 

如：用于制备亚硫酸氢盐直接测序法预测脑胶质瘤的制剂；所述的制剂中包括：根据POTEH基因启动子区CpG岛设计的，采用亚硫酸氢盐直接测序法的引物序列为： 

F：5′TGATATTTGTGGTTTTAAGATTTATGTAG 3′， 

R：5′ATTACAAACCAACCAAACCATTAC 3′。 

一种用于人脑胶质瘤预后预测的POTEH基因启动子区甲基化检测试剂盒，包括以下引物： 

F：5′TGATATTTGTGGTTTTAAGATTTATGTAG 3′， 

R：5′ATTACAAACCAACCAAACCATTAC 3′。 

申请人发现POTEH基因在脑胶质瘤组织中表达上调(图1)。POTEH转录起始位点上游-854bp至-353bp为一典型的CpG岛(图2)，该CpG岛中CG位点在正常的脑组织中均处于高甲基化状态，而在POTEH表达上调的脑胶质瘤组织中其甲基化程度降低(部分结果见图3)。POTEH低甲基化的胶质瘤病人总生存率明显低于高甲基化的病人(图4)，提示POTEH基因是胶质瘤中的低甲基化基因，是预测胶质瘤预后的分子标志。本发明为脑胶质瘤预后预测提供了强有力的分子生物学基础，具有深远的临床意义和推广性。 

附图说明

图1 POTEH蛋白在正常脑组织及不同病理分级胶质瘤中的表达； 

A：正常脑组织；B：胶质瘤WHO I级；C：胶质瘤WHO II级；D：胶质瘤WHO III级；E：胶质瘤WHO IV级； 

图2 POTEH基因启动子的活性区域-854bp至-353bp为一典型的CpG岛； 

浅蓝色区域为CpG岛，横坐标下红色竖线表示CG位点；