[发明专利]十二卷类多肉植物的离体培养方法

权利要求书

1.一种十二卷类多肉植物的离体培养方法，其特征在于，步骤为：

第一步：外植体的选择与消毒

在春夏季节，选取十二卷多肉植物刚抽生的呈半木质化的花枝，自基部整枝剪下，清洗干净后，消毒；

第二步：无菌系的建立

将消毒过的花枝切成0.5-1.5厘米的茎段，接种于发生培养基上，进行初始诱导培养；

第三步：无菌系丛生芽的继代增殖

将初始培养获得的无菌芽切下，接种于第二培养基进行增殖，待在基部叶腋间分化出腋芽后，该腋芽即为丛生芽，继续切割后不断增殖；

第四步：生根培养

将丛生芽切成单芽，接种于第三培养基进行生根培养，在基部分分化出不定根后，试管苗培育成功；

第五步：试管苗炼苗培养

将生根的十二卷试管苗在苗床上作炼苗培养。

2.如权利要求1所述的一种十二卷类多肉植物的离体培养方法，其特征在于，第一步中所述清洗的步骤为：用洗洁精将剪下的花枝清洗两遍，用纱布包裹后用水冲洗3小时后沥干。

3.如权利要求1所述的一种十二卷类多肉植物的离体培养方法，其特征在于，第一步中所述消毒在无菌室超净台上进行，其步骤为：先用质量百分比浓度为75%乙醇的对清洗后的花枝处理60秒，然后用与水的质量比为1:50的洁尔敏溶液处理15分钟，最后用质量百分比浓度为0.1%的氯化汞溶液处理15分钟，用无菌水冲洗三遍。

4.如权利要求1所述的一种十二卷类多肉植物的离体培养方法，其特征在于，第二步中所述发生培养基及第三步中所述第二培养基的成份相同，为加入了0.5-2.0mg/L的6-氨基腺嘌呤、0.005-0.2mg/L的荼乙酸、0.05-0.1mg/L的赤霉素、质量百分比为3%的蔗糖及5.5g/L琼脂粉的MS培养基。

5.如权利要求1所述的一种十二卷类多肉植物的离体培养方法，其特征在于，第二步中所述初始诱导培养、第三步中所述增殖及第四步中所述生根培养的培养温度为25度，光照强度为3000LX，光照时间为12小时/天。

6.如权利要求1所述的一种十二卷类多肉植物的离体培养方法，其特征在于，第三步中所述第三培养为加入了0.1-0.2mg/L的荼乙酸、0.05-0.1mg/L的吲哚丁酸、质量百分比为2%的蔗糖及5.5g/L琼脂粉的1/2MS培养基。

7.如权利要求1所述的一种十二卷类多肉植物的离体培养方法，其特征在于，第五步中所述炼苗培养的培养基质为泥炭和珍珠岩，泥炭与珍珠岩之间的质量比为1:1，其具体步骤为：将幼苗载入培养基质后浇足活棵水，用尼龙薄膜覆盖防止幼苗失水萎焉，3天后揭去尼龙薄膜逐步炼苗。

8.如权利要求7所述的一种十二卷类多肉植物的离体培养方法，其特征在于，所述逐步炼苗的步骤为：在前7天内，每天叶面喷水2-3次，7天后早晚各喷一次，15天后用质量百分比浓度为0.1%的硝酸铵加质量百分比浓度为0.1%的磷酸二氢钾追肥，叶面及根际施肥同时进行，15天后根据基枝含水量适当浇水，保持不干不浇，浇则浇透，3个月后，试管苗可以移栽至各种容器内作盆栽培育。